安立國第二版動物細胞工程思考題參考答案

1、哺乳動物的克隆方法：胚胎干細胞核移植、胚胎細胞核移植、胎兒成纖維細胞核移植、體細胞核哺乳動物的克隆方法：胚胎干細胞核移植、胚胎細胞核移植、胎兒成纖維細胞核移植、體細胞核移植。移植。第一章第一章緒論課后習題答案緒論課后習題答案1.動物細胞工程主要有哪些內(nèi)容？這些技術(shù)有何用途？動物細胞工程主要有哪些內(nèi)容？這些技術(shù)有何用途？答：1.組織和細胞培養(yǎng)技術(shù)2.細胞融合與單克隆抗體技術(shù)3.細胞核移植技術(shù)4.胚胎工程技術(shù)5.干細胞技術(shù)6.轉(zhuǎn)基因技術(shù)7.

2、染色體工程細胞工程的應用有：A.單克隆抗體的應用：疾病診斷與治療、微量大分子物資的檢測、貴重生物活性物的分離與提純、特殊疾病治療、與藥物交聯(lián)治療疾??；B.轉(zhuǎn)基因技術(shù)的應用：建立疾病的動物模型、品種改良和抗病育種、“乳腺生物發(fā)應器”、基因代替治療、異種器官移植、基因功能研究；C.細胞與組織替代治療；D.治療人類不孕癥；E.優(yōu)良品種繁育；F.生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因家畜；G.保護瀕危動物。2.追蹤動物細胞工程研究與應用的最新進展，并預測其發(fā)展趨勢。追蹤動

3、物細胞工程研究與應用的最新進展，并預測其發(fā)展趨勢。第二章第二章細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)1、體外培養(yǎng)細胞有哪些類型？其生長特點有什么區(qū)別？、體外培養(yǎng)細胞有哪些類型？其生長特點有什么區(qū)別？答：體外培養(yǎng)的細胞根據(jù)其生長方式，主要分為貼壁生長型細胞和懸浮生長型細胞。離體細胞必須貼附于底物上才能生長的細胞稱為貼壁生長型細胞。有機體的絕大部分細胞必須貼附在某一固相表面才能生存和生長。動物細胞培養(yǎng)中，大多數(shù)細胞必須貼附在固相表面才能生長，當細胞布滿表面后即停

4、止生長。從生長表面脫落進入液體得細胞通常不再生長而逐漸退化，這種細胞稱為單層附壁細胞。貼壁生長的細胞在活體體內(nèi)時，形態(tài)各異，而體外培養(yǎng)狀態(tài)下則在形態(tài)上比較單一而失去其在體內(nèi)時原有的特征。按照培養(yǎng)細胞的形態(tài)，主要可分為以下幾類：成纖維細胞型、上皮型細胞、游走型細胞、多形型細胞；少數(shù)細胞類型在體外培養(yǎng)時不需要附著于底物而于懸浮狀態(tài)下即可生長，包括一些取自血、脾或骨髓的培養(yǎng)細胞，如血液白細胞、淋巴組織細胞、某些腫瘤細胞、雜交瘤細胞、轉(zhuǎn)化細胞等

5、，這些細胞在懸浮中生長良好，可以是單個細胞或為細小的細胞團，觀察使細胞呈圓形。由于懸浮生長于培養(yǎng)液中，因此其生存空間大，具有能夠提供繁殖大量細胞、傳代方便、易于收獲細胞等優(yōu)點，易于大規(guī)模生產(chǎn)，便于過程的控制。2、細胞系的生長過程包括哪些主要階段？每一生長階段各有什么特征？、細胞系的生長過程包括哪些主要階段？每一生長階段各有什么特征？答：進行正常細胞培養(yǎng)時，不論細胞的種類和供體的年齡如何，細胞系的生長過程都經(jīng)歷原代培養(yǎng)期、傳代培養(yǎng)期和衰退

6、期（或永生化）三個階段。①原代培養(yǎng)期也稱初代培養(yǎng)期，即從體內(nèi)取出組織接種培養(yǎng)到第一次傳代階段，一般持續(xù)1～4周，此期細胞呈活躍的移動，可見細胞分裂，但不旺盛。原代培養(yǎng)細胞與體內(nèi)原組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)5、常用的組織細胞分離方法有哪幾種？、常用的組織細胞分離方法有哪幾種？答：分散組織的方法有機械法分離和消化分離法兩種；根據(jù)組織種類和培養(yǎng)要求，宜采用相應的方法。(1).機械分離法：A.離心分離法B.切割分離法C.機械分散法；(2).消化分離法：A.

7、胰蛋白酶消化法B.膠原酶消化法C.EDTA（螯合劑）消化法6、貼壁細胞傳代時采用何種方法？其技術(shù)關(guān)鍵是什么？、貼壁細胞傳代時采用何種方法？其技術(shù)關(guān)鍵是什么？答：貼壁細胞傳代時采用消化分離法，其技術(shù)關(guān)鍵是把握好傳代時機，消化時間要適度，消化液濃度要適宜，傳代的細胞接種數(shù)量可適當多一些，使細胞能盡快適應新環(huán)境而利于細胞生存和增殖，部分貼壁生長細胞不經(jīng)消化處理直接進行吹打也可使細胞從壁上脫落下來，而進行傳代。7、常用的細胞克隆化方法有哪些？簡

8、述其主要技術(shù)環(huán)節(jié)、常用的細胞克隆化方法有哪些？簡述其主要技術(shù)環(huán)節(jié)答：主要方法有：稀釋鋪板法、飼養(yǎng)層克隆法、瓊脂克隆法、毛細管克隆法、熒光激活分選法等。稀釋鋪板法：稀釋鋪板法：也稱為有限稀釋法。其原理是通過適當?shù)南♂屵_到分離單個細胞的目的。將培養(yǎng)的細胞進行計數(shù)，用培養(yǎng)液進行稀釋到5～10個細胞ml后，在多孔培養(yǎng)板(一般為96孔板)各孔內(nèi)分別加入細胞懸液0.1～0.2ml，使孔內(nèi)落入細胞的幾率為每孔一個細胞。鏡檢每孔所含細胞數(shù)，標記含單個細

9、胞的孔，培養(yǎng)一段時間后，凡在已標記的孔中有生長增殖的細胞群即為克隆細胞。常規(guī)使用中，一般不進行鏡檢，多采用多次克隆化培養(yǎng)得到單細胞的克隆系。飼養(yǎng)層克隆法：飼養(yǎng)層克隆法：對一些生長緩慢的細胞(如雜交瘤細胞)，單個細胞或密度極低時細胞難以存活和增殖，在培養(yǎng)皿中加入能貼壁生長的其他細胞（稱為飼養(yǎng)細胞），這些細胞不僅能起到飼養(yǎng)作用，還能清除培養(yǎng)體系中的死、傷細胞及其碎片。飼養(yǎng)細胞的存在可以促進單個細胞生長為細胞克隆，達到克隆化目的。常用的飼養(yǎng)細

10、胞有成纖維細胞、胸腺細胞和巨噬細胞。巨噬細胞不僅能起飼養(yǎng)作用，還能清除培養(yǎng)體系中死、傷細胞及其碎片。瓊脂克隆法：瓊脂克隆法：將細胞培養(yǎng)在軟瓊脂形成的半固體培養(yǎng)基上，單個細胞可在半固體的培養(yǎng)基上增殖形成集落。常用的軟瓊脂法是在培養(yǎng)皿中先鋪一層0.5%的瓊脂，待凝固后再鋪一層0.25%的軟瓊脂，加入的細胞數(shù)要在幾率上使長出的集落是一個細胞的后代。長出集落后，再轉(zhuǎn)移到其他培養(yǎng)器中進行擴增分析。毛細管克隆法：毛細管克隆法：毛細管克隆細胞法是最早