生化實(shí)驗(yàn)思考題參考答案

1、生化實(shí)驗(yàn)講義思考題參考答案生化實(shí)驗(yàn)講義思考題參考答案實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一淀粉的提取和水解淀粉的提取和水解1、實(shí)驗(yàn)材料的選擇依據(jù)是什么？答：生化實(shí)驗(yàn)的材料選擇原則是含量高、來(lái)源豐富、制備工藝簡(jiǎn)單、成本低。從科研工作的角度選材，還應(yīng)當(dāng)注意具體的情況，如植物的季節(jié)性、地理位置和生長(zhǎng)環(huán)境等，動(dòng)物材料要注意其年齡、性別、營(yíng)養(yǎng)狀況、遺傳素質(zhì)和生理狀態(tài)等，微生物材料要注意菌種的代數(shù)和培養(yǎng)基成分的差異等。2、材料的破碎方法有哪些？答：(1)機(jī)械的方法：包括研磨

2、法、組織搗碎法；(2)物理法：包括凍融法、超聲波處理法、壓榨法、冷然交替法等；(3)化學(xué)與生物化學(xué)方法：包括溶脹法、酶解法、有機(jī)溶劑處理法等。實(shí)驗(yàn)二實(shí)驗(yàn)二總糖與還原糖的測(cè)定總糖與還原糖的測(cè)定1、堿性銅試劑法測(cè)定還原糖是直接滴定還是間接滴定？?jī)煞N滴定方法各有何優(yōu)缺點(diǎn)？答:我們采用的是堿性銅試劑法中的間接法測(cè)定還原糖的含量。間接法的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便、反應(yīng)條件溫和，缺點(diǎn)是在生成單質(zhì)碘和轉(zhuǎn)移反應(yīng)產(chǎn)物的過(guò)程中容易引入誤差；直接法的優(yōu)點(diǎn)是反應(yīng)原理直觀

3、易懂，缺點(diǎn)是操作較復(fù)雜，條件劇烈，不易控制。實(shí)驗(yàn)五實(shí)驗(yàn)五粗脂肪的定量測(cè)定粗脂肪的定量測(cè)定─索氏提取法索氏提取法（1）本實(shí)驗(yàn)制備得到的是粗脂肪，若要制備單一組分的脂類成分，可用什么方法進(jìn)一步處理？答：硅膠柱層析，高效液相色譜，氣相色譜等。（2）本實(shí)驗(yàn)樣品制備時(shí)烘干為什么要避免過(guò)熱答：防止脂質(zhì)被氧化。實(shí)驗(yàn)六實(shí)驗(yàn)六蛋白質(zhì)等電點(diǎn)測(cè)定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)測(cè)定1、在分離蛋白質(zhì)的時(shí)候，等電點(diǎn)有何實(shí)際應(yīng)用價(jià)值？答:在等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)分子與分子間因碰撞而引起聚沉

4、的傾向增加，所以處于等電點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)十實(shí)驗(yàn)十影響酶活性的因素影響酶活性的因素（1）本實(shí)驗(yàn)中如何通過(guò)淀粉液加碘后的顏色的變化來(lái)判斷酶促反應(yīng)快慢的？答：在唾液淀粉酶的作用下，淀粉水解，經(jīng)過(guò)一系列被稱為糊精的中間產(chǎn)物，最后生成麥芽糖和葡萄糖。變化過(guò)程如下：淀粉→紫色糊精→紅色糊精→麥牙糖、葡萄糖淀粉、紫色糊精、紅色糊精遇碘后分別呈藍(lán)色、紫色與紅色。麥芽糖和葡萄糖遇碘不變色。因此反應(yīng)后顏色如為藍(lán)色說(shuō)明酶活力低，淡黃色則說(shuō)明酶活力高。（2）如何通過(guò)加

5、入班氏試劑后生成沉淀多少來(lái)反映酶促反應(yīng)快慢的？答：淀粉與糊精無(wú)還原性，或還原性很弱，對(duì)本尼迪克特試劑呈陰性反應(yīng)。麥芽糖、葡萄糖是還原糖，與本尼迪克特試劑共熱后生成紅棕色氧化亞銅的沉淀。因此，產(chǎn)生紅棕色氧化亞銅的沉淀越多說(shuō)明酶活力越高。（3）通過(guò)本實(shí)驗(yàn)，結(jié)合理論課的學(xué)習(xí)，小結(jié)出哪些因素影響唾液淀粉酶活性？是如何影響的？答：溫度、pH、激活劑、抑制劑等。高于或低于最適溫度或pH，酶活力都會(huì)降低；激活劑和抑制劑不是絕對(duì)的，只是相對(duì)而言，隨著濃

6、度的變化而變化。實(shí)驗(yàn)十二實(shí)驗(yàn)十二堿性磷酸酶的分離提取及比活力的測(cè)定堿性磷酸酶的分離提取及比活力的測(cè)定(1)試說(shuō)明用硫酸銨分級(jí)分離酶的方法及應(yīng)注意的事件。答：用鹽分級(jí)沉淀是一種應(yīng)用非常廣泛的方法。由于硫酸銨在水中溶解度很大（20℃，每升可溶760克），并且對(duì)許多酶沒(méi)有很大的影響，因此它是最常用的鹽。例如：某酶（或蛋白質(zhì)）發(fā)生鹽析的范圍為3565%飽和硫酸銨的濃度，因此可先選擇30%飽和硫酸銨濃度，去沉淀雜蛋白，然后選擇70%飽和硫濃度酸銨

7、，留沉淀（含所要的酶）。注意事項(xiàng)：在用硫酸銨沉淀酶蛋白時(shí)，要注意緩沖液的pH值和溫度，鹽的溶解度隨溫度不同而有較大的變化，同時(shí)酶的溶解度亦隨溫度的改變而改變。在加硫酸銨時(shí)，需事先將硫酸銨粉末研細(xì)。加入過(guò)程需緩慢并及時(shí)攪拌溶解。攪拌要緩慢，盡量防止泡沫的形成，以免酶蛋白在溶液中表面變性。(2)用正丁醇處理勻漿液可以有效地使堿性磷酸酶酶蛋白釋放，使酶的產(chǎn)量大大提高，這是為什么？答：因?yàn)閴A性磷酸酶酶是一種膜蛋白，正丁醇處理后可使結(jié)合在膜上的蛋