乳酸菌培養(yǎng)及誘導培養(yǎng)基

1、嗜酸乳桿菌嗜酸乳桿菌試驗方法試驗方法一株嗜酸乳桿菌產共軛亞油酸條件的優(yōu)化[J].中國釀造，20091、基礎培養(yǎng)基(脫脂乳培養(yǎng)基)12.0g脫脂奶粉，蒸餾水100mL，pH自然，115℃滅菌20min。2、MRS固體培養(yǎng)基葡萄糖20.0g，蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母浸膏5.0g，無水乙酸鈉5.0g，磷酸氫二鉀2.0g，檸檬酸氫二銨2.0g，MgSO47H2O0.58g，MnSO4H2O0.33g，瓊脂15g，pH6.8左右，

2、加蒸餾水至1000mL，121℃滅菌20min。3、產酶培養(yǎng)基：脫脂乳培養(yǎng)基，并加入一定濃度的亞油酸來誘導產酶。1出發(fā)菌株的活化及純化出發(fā)菌株的活化及純化保藏的嗜酸乳桿菌接種于液體MRS培養(yǎng)基，搖勻后置36℃恒溫箱中培養(yǎng)12h，接種于液體培養(yǎng)基中活化2次。劃線接種到MRS固體培養(yǎng)基，36℃恒溫培養(yǎng)36h，嗜酸乳桿菌在120r／min的狀態(tài)下培養(yǎng)有利于嗜酸乳桿菌的繁殖。長出單個菌落后，挑取菌落進行革蘭氏染色鏡檢，確定是否純種。嗜酸乳桿菌的

3、形態(tài)與菌落特征在MRS瓊脂培養(yǎng)基上需氧培養(yǎng)48h后，菌落微小，不規(guī)則，微隆起，有光澤，灰白色，呈透明的玻璃霜花樣。10倍顯微鏡觀察表面凸凹不平，邊緣為絲狀或卷發(fā)樣。革蘭氏染色后可見菌體呈短桿狀，單個或短鏈狀排列，革蘭氏染色陽性。肉眼觀察，嗜酸乳桿菌菌落較小平臺狀，不規(guī)則、圓形凸起、邊緣整齊、質地柔軟、灰白色、有光澤。1）500mLMRS液體培養(yǎng)基2）5個250mL的三角瓶，橡膠塞，牛皮紙，繩子3）5個培養(yǎng)皿4）1個接種環(huán)，酒精燈，打火機

4、，酒精2種子的制備種子的制備活化的菌種接種于基礎培養(yǎng)基，于36℃恒溫培養(yǎng)24h，保藏備用。增菌培養(yǎng)基最佳接種量為3%（活菌數(shù)為108個mL）★3產酶誘導培養(yǎng)產酶誘導培養(yǎng)用脫脂乳配成12%的產酶液體培養(yǎng)基，每250mL三角瓶中裝入100mL(含12g脫脂乳、1.50‰亞油酸)，加入1mL吐溫80，115℃滅菌30min后，接入2mL種子液(每mL含菌體5108個)，36℃培養(yǎng)36h。▲5共軛亞油酸的檢測脂肪酸的提取反應后的溶液中加入5ml

5、正己烷，充分震蕩萃取，靜置后待分層，收集上清液，在正己烷溶液中加如無水NH3SO4吸水干燥。與30℃旋轉蒸發(fā)，去除有機溶劑，將余下的液體收集在試管中待測。GCMS檢測共軛亞油酸以未接入菌種、其他步驟和條件同上的情況下所得到的正己烷萃取液為參比、正己烷為溶劑，于波長200nm～300nm處掃描樣品，觀察波長233nm處有無特征吸收峰。若在該波長處有特征吸收峰者，表明其發(fā)酵液中有CLA生成，讀取波長234nm處吸光度值，根據(jù)CLA標準曲線所

6、得CLA濃度，計算發(fā)酵液中CLA的生成量。用UV1600可見紫外分光光度計在190nm～300nm對共軛亞油酸進行波長掃描，以確定其最大的吸收波長。其波長掃描圖如圖2.1，得其最大吸收波長233nm。圖2.1CLA最大吸收波長掃描圖Fig.2.1AbsptionwavemaximumofCLA張智，余萍.嗜酸乳桿菌的篩選及培養(yǎng)基的優(yōu)化[J].中國乳品工業(yè)200735(6)：25～27.★陳洪儀，楊楠.嗜酸乳桿菌培養(yǎng)的研究[J].現(xiàn)代食品