fp1和hp在6羥基多巴胺導(dǎo)致的腹側(cè)中腦神經(jīng)元和mes23.5細(xì)胞鐵聚積中的作用研究

1、青島大學(xué)博士學(xué)位論文FP1和HP在6-羥基多巴胺導(dǎo)致的腹側(cè)中腦神經(jīng)元和MES23.5細(xì)胞鐵聚積中的作用研究姓名：宋寧申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生理學(xué)指導(dǎo)教師：謝俊霞20080526處理組比1 0 0 ∥g ／m l 處理組增加得更明顯，I - I P m R N A 表達(dá)水平?jīng)]有變化。4 ．1 0 ／2 m o l ／L 6 ．O H D A 處理2 4 h 后，體外培養(yǎng)的V M 神經(jīng)元和M E S 2 3 ．5 細(xì)胞中鐵調(diào)節(jié)蛋白( i

2、r o n r e g u l a t o r yp r o t e i n ，I R P ) 1 和I R P 2 蛋白和m R N A 的表達(dá)水平都有明顯上調(diào)。5 ．成功構(gòu)建了p S i l e n c e r - I R P l 和p S i l e n c e r - I R P 2 s i R N A 表達(dá)載體。特異性的沉默I R P l 或I R P 2 的表達(dá)后，I R P l 蛋白水平下降了7 1 ±6 ％；I

3、 R P 2 蛋白水平下降了6 5 _ + 5 ％。6 ．干涉I R P l 或I R P 2 后，F(xiàn) P l 蛋白和m R N A 表達(dá)水平與空載體對(duì)照組相比都明顯上調(diào)。1 0 p m o l ／L 6 一O H D A 處理2 4h 后，F(xiàn) P l m R N A 的表達(dá)水平仍有降低，但降低的幅度明顯減輕；H P m R N A 的表達(dá)下降被完全逆轉(zhuǎn)，其表達(dá)出現(xiàn)了上調(diào)。7 ．成功構(gòu)建了p S i l e n c e r - F P

4、l 和p S i l e n c e r - H Ps i R N A 表達(dá)載體。特異性的沉默F(xiàn) P l或H P 的表達(dá)后，F(xiàn) P l 蛋白水平下降了5 7 ±3 ％；H P 蛋白水平下降了6 1 - + 5 ％。8 ．F P l 干涉后，1 0 0 F m o l ／L 鐵孵育4 h 后細(xì)胞內(nèi)鐵含量明顯增加，細(xì)胞內(nèi)增加的鐵上調(diào)了L 型鐵蛋白m R N A 水平，進(jìn)一步增加了細(xì)胞內(nèi)高鐵導(dǎo)致的乳酸脫氫酶( 1 a c t a t

5、 ed e h y d r o g e n a s e ，L D H ) 釋放和活性氧物質(zhì)( r e a c t i v e o x i d e s p e c i e s ，R O S ) 的生成，降低了線粒體跨膜電位( m i t o c h o n d r i a lf f a n s m e m b r a n e p o t e n t i a l ，A 、1 ／m ) 。H P干涉后，除了使△甲m 降低得更明顯外，對(duì)細(xì)胞內(nèi)的

6、鐵水平、L 型鐵蛋白的表達(dá)、L D H 的釋放和R O S 的生成都沒有影響。鐵離子螯合劑去鐵胺l m m o l ／1 預(yù)孵育3h可以完全阻斷細(xì)胞內(nèi)高鐵引起的L D H 的釋放、R O S 的生成和A q J m 的下降。9 ．成功構(gòu)建了p l R E S —F P l 和p l R E S —H P —f 1 P 1 表達(dá)載體。p l R E S - F P l 轉(zhuǎn)染的M E S 2 3 ．5細(xì)胞中，F(xiàn) P l 蛋白水平是空載體對(duì)照

7、組的3 ．3 8 _ + 0 ．0 6 倍；p I R E S —H P —F P l 轉(zhuǎn)染M E S 2 3 ．5 細(xì)胞中，F(xiàn) P l 蛋白水平是空載體轉(zhuǎn)染組的2 ．8 6 倍±0 ．0 4 ，H P 蛋白水平是空載體轉(zhuǎn)染組的3 ．2 1 _ + 0 ．0 6 倍。1 0 ．高表達(dá)F P l 和H P 的M E S 2 3 ．5 細(xì)胞鐵轉(zhuǎn)出功能都明顯增強(qiáng)。1 1 ．p c D N A 3 ．1 一唧一F l a g t a