二苯乙烯苷對6-羥基多巴胺誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的：觀察二苯乙烯苷（ tetrahydroxystilbene glucoside, TSG）對6-羥基多巴胺（6-hydroxydopamine,6-OHDA）誘導(dǎo)的多巴胺能（dopaminergic, DA）神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用，并探討其可能機(jī)制。
　　方法：(1)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：大鼠中腦黒質(zhì)注射6-OHDA（8μg）制備帕金森病模型，實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為六組：空白組、假手術(shù)組、TSG（50 mg/kg）組、模型（6-OHDA，8μg）組

2、、6-OHDA+TSG（10 mg/kg）組、6-OHDA+TSG（50 mg/kg）組。大鼠腹腔連續(xù)注射TSG14 d，其中第一次給藥30 min后大鼠中腦黑質(zhì)注射6-OHDA。采用免疫組織化學(xué)染色法檢測抗酪氨酸羥化酶（tyrosine hydroxylase, TH）抗體和抗補(bǔ)體受體-3（ OX-42）抗體，分別觀察 TSG對 DA神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用及對小膠質(zhì)細(xì)胞（microglia, MG）激活的抑制作用。(2)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：取胎齡

3、14-15 d的SD大鼠胚胎中腦制備神經(jīng)元—膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)模型，實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為空白組、TSG（80μM）組、6-OHDA（40μM）組、6-OHDA+TSG（20μM）組、6-OHDA+TSG（40μM）組、6-OHDA+TSG（80μM）組。細(xì)胞按分組劑量給予TSG處理30 min后再加入6-OHDA，采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測抗TH抗體和抗OX-42抗體，分別觀察TSG對DA神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用及對MG激活的抑制作用。采用Griess

4、試劑法和ELISA法分別檢測細(xì)胞上清液中NO、TNF-α和IL-1β含量。采用蛋白免疫印跡法（Western blotting）檢測 TH和 MG表面特異性蛋白離子鈣接頭蛋白（ionized calcium-binding adapter molecule-1, Iba-1）以及絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信號(hào)通路中ERK1/2和p38磷酸化蛋白的表達(dá)水平。
　　

5、結(jié)果：(1)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：與空白組相比，模型組DA神經(jīng)元明顯減少，激活的MG增多；經(jīng)TSG處理后，DA神經(jīng)元明顯增多，激活的MG明顯減少。
　　(2)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：與空白組比較，模型組DA神經(jīng)元及樹突明顯減少，MG激活明顯增多，細(xì)胞培養(yǎng)上清液中NO、TNF-α和IL-1β的含量升高，ERK1/2和p38蛋白磷酸化表達(dá)增強(qiáng)；經(jīng) TSG處理后，DA神經(jīng)元明顯增加，MG激活被抑制，細(xì)胞上清液中NO、TNF-α和IL-1β的含量明顯下降，ERK1