二苯乙烯苷對(duì)LPC誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的:
　　 觀察在溶血性磷脂酰膽堿(LPC)誘導(dǎo)下,二苯乙烯苷(TSG)對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞(VEC)損傷的保護(hù)作用,并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行的研究。
　　 方法:
　　 培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)株,經(jīng)傳代,于第3-4代用于實(shí)驗(yàn)。隨機(jī)將細(xì)胞分為:空白對(duì)照:模型組;實(shí)驗(yàn)組。
　　 首先將LPC以10ug/ml作用于HUVEC,并與細(xì)胞一起孵育24小時(shí)誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷,建立細(xì)胞損傷的模型;將TSG以10.

2、0;1.0;0.1μol/l預(yù)先作用于HUVEC1小時(shí)后,再給予10μm/ml的LPC作用于HUVEC共同孵育24小時(shí),建立實(shí)驗(yàn)組;同時(shí),設(shè)立不加藥物的空白對(duì)照組。然后,收集細(xì)胞上清液測(cè)定其丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和非對(duì)稱性二甲基精氨酸(ADMA)含量;收集細(xì)胞,測(cè)定其中的活性氧(ROS)水平、細(xì)胞的凋亡率和存活率。用硝酸還原酶法檢測(cè)細(xì)胞上清液中的NO的濃度;用硫代巴比妥法檢測(cè)細(xì)胞上清液中MDA的含量;生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫

3、吸附法(ELISA)檢測(cè)細(xì)胞上清液中ADMA含量;熒光顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)ROS水平、AnnexinV-FITC/PI熒光雙染色法流式細(xì)胞儀測(cè)定其細(xì)胞的凋亡率、MTT法檢測(cè)細(xì)胞的存活率。
　　 結(jié)果:
　　 1.與空白對(duì)照組比較結(jié)果顯示,用LPC(10μg/ml)作用于HUVEC24小時(shí)后,觀測(cè)到細(xì)胞培養(yǎng)上清液中MDA含量(P＜0.05),ADMA含量(P＜0.05)及細(xì)胞內(nèi)ROS水平(P＜0.05)都顯著性增加,而細(xì)胞培養(yǎng)

4、上清液中NO含量明顯降低(P＜0.05),細(xì)胞的凋亡有所增加(P＜0.05),致使細(xì)胞的存活率降低(P＜0.05)。
　　 2.與LPC損傷組比較中,可以看到,以10.0,1.0,0.1umol/l濃度的TSG作用HUVEC1小時(shí)后,再予以終濃度為10μg/ml的LPC作用HUVEC一起孵育24小時(shí)后,顯示:其均能使細(xì)胞培養(yǎng)上清液中MDA含量(P＜0.05)、ADMA含量(P＜0.05)及細(xì)胞內(nèi)ROS水平(P＜0.05)顯著性降