二苯乙烯苷對脂多糖誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元損傷的保護作用及機制研究.pdf

1、目的：觀察二苯乙烯苷(tetrahydroxystibene glucoside，TSG)對脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元損傷的保護作用，并探討其可能機制。
　　方法：(1)取胎齡14-15天的SD大鼠胎鼠中腦制備神經(jīng)元-膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)模型，實驗隨機分為空白組、TSG(80μmol/L)組、LPS(10 ng/mL)組、LPS+TSG(20μmol/L)低劑量組、LPS+TSG(40μm

2、ol/L)中劑量組、LPS+TSG(80μmol/L)高劑量組。藥物作用于細(xì)胞作用30 min后加入 LPS。采用抗酪氨酸羥化酶（tyrosine hydroxylase，TH）抗體通過免疫細(xì)胞化學(xué)染色法觀察TSG對多巴胺能神經(jīng)元損傷的保護作用。Griess試劑和ELISA法分別檢測共培養(yǎng)上清液中NO、TNF-α和IL-1β含量。(2)選取出生1天的新生大鼠全腦建立原代小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)模型，蛋白免疫印跡法（Western blotting

3、）檢測小膠質(zhì)細(xì)胞表面特異性蛋白離子鈣接頭蛋白(ionized calcium-binding adapter molecule-1,Iba-1)以及NF-κB通路（p65）蛋白的表達水平。(3)單側(cè)黒質(zhì)注射LPS(5 ug)制備大鼠多巴胺能神經(jīng)元損傷模型，實驗隨機分為5組：空白組、TSG(50 mg/kg)組，LPS(5 ug)組，LPS+TSG(10 mg/kg)低劑量組，LPS+TSG(50 mg/kg)高劑量組。大鼠每天腹腔注射T

4、SG連續(xù)7天，空白組注射同體積生理鹽水。采用抗TH和抗補體受體-3（OX-42）抗體通過免疫組織化學(xué)染色法分別觀察 TSG對多巴胺能神經(jīng)損傷的保護作用及對小膠質(zhì)細(xì)胞激活的抑制作用。
　　結(jié)果：(1)在神經(jīng)元-膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)模型中，與空白組比較，LPS組DA神經(jīng)元數(shù)量明顯減少，細(xì)胞培養(yǎng)上清液中NO、TNF-α和IL-1β的含量明顯升高；與LPS組比較，TSG能夠拮抗LPS誘導(dǎo)的DA神經(jīng)元損傷，降低細(xì)胞培養(yǎng)上清液中NO、TNF-α和I

5、L-1β的含量。(2)在原代小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)模型中，與空白組比較，LPS組Iba1表達明顯升高，NF-κB信號通路被激活；與LPS組比較，TSG能夠降低Iba1的蛋白表達，抑制NF-κB信號通路激活。(3)每天腹腔給予TSG連續(xù)7天，發(fā)現(xiàn)TSG能夠保護中腦黑質(zhì)直接注射LPS誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元損傷，并能夠抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的激活。
　　結(jié)論：TSG對LPS誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元損傷具有保護作用，其作用機制與抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的激活及釋放多種炎