利用農桿菌介導的幼穗法將水稻osdreb2.2基因導入小麥的研究

1、分類號：$ 5 1 2 ．1密 級： 公Ⅱ單位代碼： 1 0 0 8 6學 號： 2 0 0 9 2 8 4利用農桿菌介導的幼穗法將水稻O s D R E B 2 ．2 基因導入小麥的研究S t u d i e s o n R i c eo S D R E B 2 。2G e n e T r a n s f o r m a t i o n o fW h e a t v i a t h e A g r o b a c t e r i u

2、m —m e d i a t e d F l o r a lD i p M e t h o d學位申請人：指導教師：學科專業(yè)：學位類別：授予單位：答辯日期：王維楊學舉 教 授郎明林 副研究員作物遺傳育種農學碩士河北農業(yè)大學二。一二年 月 日摘要鹽堿、干旱、低溫等非生物逆境脅迫嚴重影響植物的生長發(fā)育，是造成農作物減產的直接原因。逆境響應轉錄因子的表達能夠產生與順式元件及其它相關蛋白之問的相互作用，可激活或抑制下游一系列抗逆功能基因的轉錄，

3、從而提高植物的綜合抗逆性，在抗逆轉基因育種中具有重要功能價值。植物中A P 2 家族的D R E B 類轉錄因子基因是近年來抗逆分子育種研究的熱點，該類基因對提高植物的綜合抗逆性具有重要科學意義和應用價值。小麥是世界上重要的糧食作物，目I i l f , J , 麥新品種的培育依然主要靠常規(guī)育種。雖然近幾年己逐步取得了一些可喜進展，但相對于玉米、水稻等其他禾本科作物，其轉基因研究進展仍然比較緩慢。利用現代基因工程技術進行小麥的品種改良是

4、當前小麥育種的一個新方向。它可以打破生殖隔離，使得不同物種問遺傳交流成為可能，為拓寬植物可利用基因庫創(chuàng)造條件，彌補了常規(guī)雜交育種的不足，加速了作物遺傳育種的發(fā)展。本研究以實驗室和大田中處于丌花期的小麥品種‘周麥1 6 ’和‘冀麥3 8 ’幼穗為材料，嘗試了以農桿菌介導的幼穗侵染法向小麥轉化水稻A P 2 家族O s D R E B 2 ．2 基因的研究。所用載體為C a M V 3 5 S 啟動子驅動的無報告基因的的植物表達載體P B

5、l l 2 1 ．O s D R E B 2 ．2 ，所用農桿菌為E H A l 0 5 和G V 3 1 0 1 。基因組D N A P C R 技術驗證了在T 1 代獲得了轉基因植株，經過對T 1 代1 0 6 株共1 0 5 9 個籽粒結果統(tǒng)計表明，農桿菌介導的幼穗法平均轉化率達到了3 4 ．8 ％，其中，不同的農桿菌菌株對不同的小麥品種表現出不同的轉化效率。在此基礎上提取了T 2 代植株8 個家系2 8 個植株的總R N A ，

6、經R T ．P C R 進行轉錄水平的檢測，結果在2 8 個株系均檢測到了伙D R E B 2 ．2基因的表達，其中有2 3 個株系為高的轉錄水平表達。這表明轉化的O s D R E B 2 ．2 基因已經成功遺傳到第T 2 代，并在轉錄水平上實現了穩(wěn)定的表達。通過2 0 ％P E G 和2 5 0 m MN a C l 處理，驗證了小麥植株過表達水稻O s D R E B 2 ．2 基因顯著提高了幼苗的抗旱能力，部分植系顯示了高的抗鹽