基因槍介導(dǎo)法將葉片衰老延緩基因P-,SAG12-—IPT導(dǎo)入小麥品種的研究.pdf

1、葉片是小麥進(jìn)行光合作用的重要器官，其衰老引起的葉片同化功能減退限制了小麥產(chǎn)量潛力的發(fā)揮。細(xì)胞分裂素具有延緩植物細(xì)胞和組織衰老的特性，隨著細(xì)胞分裂素合成相關(guān)基因的克隆成功，Gan和Areasino構(gòu)建了葉片衰老抑制基因PSAG12-IPT，為利用基因轉(zhuǎn)化的方法改良小麥葉片早衰現(xiàn)象提供了可能。本試驗(yàn)對利用基因槍法將葉片衰老抑制基因PSAG2-IPT導(dǎo)入普通小麥品種小偃22和寧春16進(jìn)行了研究。主要研究如下： 1、幼胚和成熟胚的愈傷組

2、織誘導(dǎo)率無明顯差異，但較高濃度的2，4-D有利于成熟胚的誘導(dǎo)，而幼胚培養(yǎng)時2，4-D濃度的影響效果因品種而異；兩種外植體分化率的高低與KT/IAA的配比均有密切關(guān)系，但高濃度的激素水平不利于成熟胚的分化；誘導(dǎo)培養(yǎng)基中低濃度的2，4-D有利于所誘導(dǎo)的愈傷組織的分化。各種培養(yǎng)基處理與品種間都存在顯著的互作效應(yīng)，小偃22成熟胚培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基組合為MSD+3.Omg/L 2，4-D和MSD+0.5mg/L IAA+1.Omg/L KT，幼胚培

3、養(yǎng)為MSD+4.0mg/L 2，4-D和MSD+0.5mg/L IAA+1.Omg/L KT；寧春16成熟胚培養(yǎng)為MSD+4.0mg/L 2，4-D和MSD+1.0mg/L IAA+1.0mg/L KT，幼胚培養(yǎng)時為MSD+1.Omg/L2，4-D和MSD+2.0mg/L IAA+2.0mg/L KT。兩種外植體中幼胚的植株再生效率高于成熟胚，更適合基因槍轉(zhuǎn)化的要求。 2、基因槍轟擊時金粉用量會明顯影響小麥幼胚的再生能力。金粉用

4、量在0～250ug/槍范圍內(nèi)時對幼胚的再生無明顯影響，但在400～600tug/槍時，幼胚再生能力隨金粉用量的增大而減?。唤鸱塾昧繉τ鷤M織再生能力的影響因小麥基因型不同有差異，對寧春16愈傷組織的再生無影響，而600ug/槍顯著降低小偃22的再生頻率。 3、不同金粉用量會影響遺傳轉(zhuǎn)化效率。適宜金粉用量為120～250ug/槍；愈傷組織作為轉(zhuǎn)化受體時，250ug/槍金粉用量的轉(zhuǎn)化率達(dá)到了2.5％，顯著高于其它用量。 4、

5、小麥愈傷組織更適宜作遺傳轉(zhuǎn)化受體。幼胚的轉(zhuǎn)化率為0.39％，愈傷組織的轉(zhuǎn)化率為0.75％。同時寧春16表現(xiàn)出更強(qiáng)的接受外源基因的能力。愈傷組織的最佳轟擊參數(shù)為：1ug DNA/槍、250ug金粉/槍、轟擊氣壓1100psi、轟擊距離9cm。 5、潮霉素適合用來進(jìn)行轉(zhuǎn)化體的篩選，并建立了寧春16的有效的篩選系統(tǒng)，在繼代培養(yǎng)基中添加80mg/L的潮霉素能有效的去除非轉(zhuǎn)化愈傷組織，達(dá)到篩選的目的。 6、首次利用基因槍介導(dǎo)法將葉片衰老延