藍(lán)藻synechococcussp.pcc7942穿梭表達(dá)質(zhì)粒載體的構(gòu)建和應(yīng)用研究

1、廈門大學(xué)碩士學(xué)位論文藍(lán)藻Synechococcus sp.PCC7942穿梭表達(dá)質(zhì)粒載體的構(gòu)建和應(yīng)用研究姓名：歐陽青申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：植物學(xué)指導(dǎo)教師：楊漢金;樓士林19990801A b s t r a c tT h ec y a n o b a c t e r i aa r e ad i v e r s e g r o u po fp h o t o s y n t h e t i c a u t o t r o p h i c

2、p r o k a r y o t e w i t h h i 曲a d a p t a b i l i t y ．B e c a u s e o f t h e i r c h a r a c t e r i s t i c s o fc y t o a r c h i t e c t u r e ，m e t a b o l i z a t i o n ，g e n e t i c sa n de v o l u t i o n ，

3、t h es t u d i e so ng e n ee n g i n e e r i n g o fc y a n o b a c t e r i a b o o m e ds i n c e 19 9 0 s ．C y a n o b a c t e r i a ，a s t h er e c e p t o ro f g e n e —t r a n s f o r m i n gs y s t e ma n da st h

4、eb i o l o g yr e a c t o r ，s h o wm e r i t so fm i c r o b ea n dp l a n t sc o n c u r r e n t l y ．T h u st h es t u d yo nc y a n o b a c t e r i aa st h er e c e p t o ro f g e n ee n g i n e e r i n ga n dt h e i

5、 re x p r e s s i o no ff o r e i g np r o t e i ne n j o y sg r e a ts i g n i f i c a n c ei nb o t h t h e o r e t i c a la n d a p p l i e d s c i e n c e s ，I nt h ee x p e r i m e n t ．S y n e c h o c o c c u ss p

6、．P C C 7 9 4 2 ，as p e c i e so f u n i c e l l u l a ra l g a e ，i su s e da st h et r a n s g e n i cr e c e p t o rc e l l t o c o n s t r u c tt h ec o r r e s p o n d i n gs h u t t e re x p r e s s i o nv e c t o r

7、 ．T a r g e tg e n ei S t r a n s f e r r e di n t ot h ec y a n o b a c t e r i a lc e l l sa n dt h et r a n s f o r m a n t s ，w h i c hC a ne x p r e s st h ep r o d u c t so f t a r g e tg e n e ，i ss c r e e n e do

8、 u t ．T h u si th a sp a y e d t h ew a y f o rf u r t h e re x p l o i t a t i o no f t r a n s g e n i cc y a n o b a c t e r i a ．T h ee x p e r i m e n tb e g i n sw i t ht h es e q u e n c ed e t e r m i n a t i o n

9、o fe n d o g e n o u ss m a l lp l a s m i d p P b S o f P l e c t o n e m ab o r y a n u m ，w h i c h i sc l o n e di n t ot h es h u t t e rv e c t o rp P R S 一1 ．C o m p u t e ra n a l y s i s i n d i c a t e st h e l

10、 o c a t i o n o ft h e r e p l i c a t i o no r i g i n i s b e t w e e n5 6 7 a n d 12 7 0 ，t h u s t h e r e p l i c a t i o n o r i g i n o ft h e s m a l lp l a s m i dp P B Si sc o n s i d e r e di n t a c t ．T om

11、a k e t h es h u t t e re x p r e s s i o nv e c t o ra ss m a l l a s p o s s i b l e ，t h e 5 ．8 k b s h u t t e r v e c t o r i s r e c o n s t r u c t e d ，a n d a s m a l l e rs h u t t e r v e c t o r p P R S 一1 ’(

12、 3 ．9 7 k b ) i S o b t a i n e d ，w h i c h p r e s e r v e s t h e 1 ．5 k be n d o g e n o u s s m a l l p l a s m i d ．A p 。g e n e a n d t h e r e p l i c a t i o n o r i g i n o fE c o l ip l a s m i d ．E c o RIa n

13、dS a lI a r eu s e dt od i g e s tP K Y L X ．7 1 ．3 5 S ，a n da6 ．5 k bf r a g m e n t c o n t a i n i n g K m 。g e n e ，C a M V 3 5 S p r o m o t e r ，m u l t i p l e c l o n i n gs i t e s ( M C S la n dr b c Sp o l y

14、At e r m i n a t o ri S o b t a i n e db ye l e c t r o p h o r e s i s ．T h e nt h ef r a g m e n t i Ss u b c l o n e d a n d r e c o m b i n e d w i t ht h es h u t t e r v e c t o rp P R S 一17 t oo b t a i nt h es h

15、u t t e re x p r e s s i o nv e c t o rp P K E 2 ，W h i c h p o s s e s s e st h e r e p l i c a t i o no r i g i n so f E ．c o l ip l a s m i da n dc y a n o b a c t e r i u mp l a s m i d ．T h ep l a s m i dp P K E 2a

16、l s o c o n t a i n s k a n a m y c i nr e s i s t a n c e g e n e a n dC a M V 3 5 Sp r o m o t e r ．M C S ．t e r m i n a t o r ．w h i c hm a k e s i t c o n v e n i e n tt oi n s e r ta n de x p r e s s t a r g e tg e

17、n ea n d t os c r e e n o u tt h er e c o m b i n a n t s ．T h es y n t h e t i c a lD N A f r a g m e n tT a lf ll0 b p )a n d P C R —a m p l i f i e d D N Af r a g m e n t U B T a l ( 3 8 0 b p ) a r es u b c l o n e d