骨保護素-BCG穿梭表達質(zhì)粒pMV361-opg的構(gòu)建及鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:構(gòu)建攜帶人骨保護素(OPG)編碼基因（opg/TNFRSF11B）的大腸桿菌分支桿菌穿梭表達載體，培養(yǎng)卡介苗菌株，為進一步以重組卡介苗(rBCG)為生物反應(yīng)器生產(chǎn)骨保護素奠定研究基礎(chǔ)。
　　 方法:1）針對opg DNA序列，設(shè)計兩端帶有EcoRI和ClaI限制性內(nèi)切酶切位點的上下游PCR引物;2）提取攜帶opg DNA序列的pMD18-T大腸桿菌質(zhì)粒作為PCR擴增模板，PCR擴增opg DNA序列，用EcoRI和ClaI

2、分別雙酶切PCR擴增產(chǎn)物以及大腸桿菌分支桿菌穿梭表達載體（pMV361質(zhì)粒），回收目的基因以及載體片段并連接;3)限制性內(nèi)切酶切、PCR擴增以及DNA測序方法驗證表達載體構(gòu)建是否成功;4）使用液體蘇通培養(yǎng)基及改良羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)卡介苗菌株。
　　 結(jié)果:通過PCR方法將opg基因從pMD18-T質(zhì)粒上擴增出來并與pMV361載體質(zhì)粒進行重組連接，構(gòu)建了新的攜帶OPG編碼基因的大腸桿菌分支桿菌穿梭表達載體pMV361-opg;重組質(zhì)

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