人骨保護素的表達及生物活性研究.pdf

1、該研究首先采用RT-PCR方法獲得人OPG全長編碼區(qū)基因:根據(jù)文獻報道的人OPGcDNA的序列,設計針對其編碼區(qū)基因的引物,提取OPG基因mRNA表達水平高的人骨肉瘤細胞系MG63細胞的總RNA進行RT-PCR,將擴增得到的基因片段插入克隆載體pUC19中,酶切鑒定正確后進行序列測定,結果證明得到的OPG編碼區(qū)基因與文獻報道完全一致,并且通過引物對基因兩側進行了修飾.為研究OPG在真核細胞中的表達,構建了OPG真核表達載體pcDNA3-

2、OPG和pIRES-EGFP-OPG,轉染小鼠胚胎成肌細胞株C2C12,篩選出穩(wěn)定轉染OPG編碼區(qū)基因的細胞系,經(jīng)Western blot檢測證實細胞可穩(wěn)定表達OPG蛋白,細胞生長狀態(tài)良好.基因治療具有治療靶向性、蛋白持續(xù)表達、價格低等優(yōu)點,腺病毒是目前骨病骨創(chuàng)傷基因治療研究領域中最常用、較為理想的載體.OPG和BMP-2在功能上的互補,且BMP-2可促進OPG的表達,因此聯(lián)合應用OPG和BMP-2,可以在骨髓微環(huán)境中發(fā)揮OPG抑制破骨