siRNA表達質(zhì)粒文庫的構(gòu)建.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、RNA干擾(RNA interference，簡稱RNAi)是雙鏈RNA分子在mRNA水平上誘發(fā)的序列特異性的轉(zhuǎn)錄后基因表達沉默。建立RNAi文庫，進行系統(tǒng)性、大規(guī)模的篩選工作是進行功能基因組學研究的有力工具。化學合成方法獲得小干擾RNA(small interference RNA，簡稱siRNA)成本昂貴，因此構(gòu)建可擴增的siRNA載體文庫意義重大。本研究旨在構(gòu)建一個針對特定人類基因的siRNA表達質(zhì)粒文庫。文庫構(gòu)建采用了雙啟動子型

2、siRNA表達載體pBUH。本文中，應用紅—綠色熒光蛋白雙報告基因系統(tǒng)進行的基因表達水平研究表明，pBUH質(zhì)?？梢杂行П磉_針對綠色熒光蛋白(Enhanced Green Fluorescence Protein，簡稱EGFP)基因的siRNA，使EGFP基因表達水平明顯下降。本研究成功克隆了300個siRNA序列的表達質(zhì)粒(每個質(zhì)粒保存了3個克隆)；并為篩選參與STS(Staurosporine)誘導凋亡通路的相關基因進行了初步準備實驗

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