GDF-15基因siRNA干擾質(zhì)粒和真核表達(dá)質(zhì)粒對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮表達(dá)及增殖的影響.pdf

1、目的：
　　在體外觀察人GDF-15基因siRNA干擾質(zhì)粒和真核表達(dá)質(zhì)粒對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖及表達(dá)VEGF、bFGF的影響。
　　方法：
　　構(gòu)建人GDF-15基因siRNA干擾質(zhì)粒和GDF-15基因真核表達(dá)質(zhì)粒，分別轉(zhuǎn)染至HUVECs細(xì)胞中,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè) GDF-15基因mRNA的表達(dá)水平，篩選出最佳的干擾序列。然后將細(xì)胞分為5組:空白對(duì)照組、干擾組、干擾對(duì)照組、真核表達(dá)組、真核表達(dá)對(duì)照組，用West

2、ern blot檢測(cè)各組細(xì)胞GDF-15蛋白的表達(dá)情況，并運(yùn)用ELISA法檢測(cè)細(xì)胞上清液中VEGF、bFGF的含量，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期，了解細(xì)胞的增殖情況。
　　結(jié)果：
　　1、實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示，HSH022853-24-CU6質(zhì)粒組的mRNA的表達(dá)明顯低于其它各組，抑制率約為92％，HSH022853-24-CU6為最佳干擾質(zhì)粒。真核表達(dá)組mRNA的表達(dá)顯著增高，達(dá)到其對(duì)照組的1000倍，且明顯高于其它各組。

3、
　　2、Western blot檢測(cè)目的蛋白，真核表達(dá)組的目的蛋白量最高，且明顯高于其它四組，干擾組最低，且明顯低于其陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組；
　　3、ELISA結(jié)果顯示，空白對(duì)照組VEGF的表達(dá)顯著高于其它四組，但真核表達(dá)組、干擾組與各自的陰性對(duì)照組相比表達(dá)量幾乎相等，而各組的bFGF幾乎測(cè)不出；
　　4、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期，進(jìn)入G2期和S期的細(xì)胞比率以真核表達(dá)組最高，明顯高于空白對(duì)照組和干擾組，但是真核表達(dá)組