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文檔簡介
1、目的:利用pSecTag2/B-OPG真核分泌表達穿梭載體,建立經(jīng)骨保護素基因(Osteoprotegerin,OPG)修飾的Beagle犬骨髓基質(zhì)細胞(bone marrow stromalcells,BMSCs)瞬時表達體系并檢測其表達能力,為基因工程與組織工程聯(lián)合治療牙周病提供細胞基礎(chǔ)。 方法:穿刺抽取成年Beagle犬骨髓約2-3ml,通過全骨髓貼壁法獲取BMSCs。傳代至第3代,脂質(zhì)體瞬時轉(zhuǎn)染經(jīng)鑒定的重組質(zhì)粒pSecT
2、ag2/B-OPG,并用RT-PCR、Western-blotting檢測OPG的表達水平。 結(jié)果:重組質(zhì)粒pSecTag2/B-OPG經(jīng)HindⅢ單酶切及EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ雙酶切,電泳顯示切下的片段均與預(yù)期大小相符,經(jīng)測序證實此基因與Genbank中[gi:33873056]提供的序列一致;RT-PCR結(jié)果顯示:重組質(zhì)粒pSecTag2/B-OPG在骨髓基質(zhì)細胞中有轉(zhuǎn)錄;Western-blotting結(jié)果顯示:在39
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