qfpcr檢測22q11.2微缺失方法建立及產前診斷應用研究

1、分類號：R 7 1 5 ．5密 級：學科類別：科學學位口專業(yè)學位囹 0學校代碼：10 06 2學 號：2 0 1 0 6 0 2 7 4 8學科門類：醫(yī) 學天肄醬科點等碩士學位論文ⅣI A S T E R ’SD I S S E R r l l A T I O N論文題目：Q F - P C R 檢測2 2 q 1 1 ．2 微缺失方法建立及產前診斷應用研究T IT L E ：T h e r e s e a r c ho f e s t

2、 a b l i s h i n gaw a y o f d e t e c t i n gt h e2 2 q 1 1 ．2m i c r o d e l e t i o n w i t h Q F - P C R a n da p p l i c a t i o n i np r e n a t a ld i a g n o s i s一級學科：臨床醫(yī)學二級學科：婦產科學論文作者：田卉指導教師：任晨春天津醫(yī)科大學研究生院二。一三年五

3、月天津醫(yī)科大學碩士學位論文中文摘要第一部分Q F - P C R 檢測2 2 q 1 1 ．2 微缺失方法的建立研究目的 以T B X l 基因附近S N P 位點作為靶位點，探討運用熒光定量P C R檢測2 2 q 1 1 ．2 微缺失的準確度及靈敏度，在此基礎上，建立一種準確度高、特異性強、快速、高通量、費用低且適合在國內開展的診斷2 2 q 1 1 ．2 D S 的方法。方法和材料1 研究對象2 0 1 0 年1 0 月至2 0

4、1 1 年5 月在天津市兒童醫(yī)院進行C H D 手術的患兒8 4 例，年齡1 個月- - - 1 4 歲，平均年齡( 2 ．5 5 _ + 0 ．3 6 ) 歲。另選3 0 例在兒童醫(yī)院進行查體的健康兒童作為對照組。2 研究材料抽取患者外周血4 m l ，其中，2 m l 用于淋巴細胞培養(yǎng)、染色體核型分析，l m l 采用酚一氯仿的方法提取D N A 并保存于．2 0 ℃?zhèn)溆茫涣韑 m l 按F I S H 處理方法進行離心、低滲、固定

5、處理并保存于．2 0 ℃?zhèn)溆谩? 染色體核型分析實驗組及對照組所有樣本通過普通光學顯微鏡進行染色體核型分析，計數(shù)3 0 個核型，分析5 個。根據(jù)染色體核型分析結果將所有樣本分成核型正常組和核型異常組。4 Q F ．P C R 對染色體核型正常的實驗組及對照組進行Q F —P C R 檢測。選取位于2 2 號染色體T B X l 基因上游4 6 6 0 b p 的S N P 位點r s 9 6 1 8 6 8 2 ( G ／A ) 作為本

6、研究的靶位點，1 9 號染色體上的P T B P l 基因作為內參基因。將原始數(shù)據(jù)、擴增曲線等信息從定量軟件中導出進行分析，得到樣本基因相對表達量r G C N 及圖譜。r G C N = I 時，表示無缺失，r G C N = 0 ．5 時，表示有缺失。5 F I S H 對染色體核型正常的實驗組和對照組進行F I S H 檢測。應用雙色熒光探針，以位于2 2 q 1 1 ．2 區(qū)域的T U P L E l 基因為目標基因，顯示紅色熒