改進(jìn)型免疫側(cè)向?qū)游鋈矍璋窓z測方法研究.pdf

1、三聚氰胺是含氮量極高的工業(yè)化學(xué)原料，在食品中非法添加長期誤食會對泌尿系統(tǒng)造成損害，因此針對三聚氰胺建立快速、靈敏、便捷的新型檢測方案對維護(hù)人類健康和食品安全具有很重要的意義。本文介紹了以下兩種快速檢測方法:
　　(1)三聚氰胺傳統(tǒng)型免疫層析檢測技術(shù)建立
　　本方法基于經(jīng)典的抗原抗體免疫識別方法和競爭法檢測原理進(jìn)行三聚氰胺的識別檢測，在金納米粒子表面標(biāo)記組裝三聚氰胺抗體，T線固定三聚氰胺抗原，C線固定羊抗鼠二抗，肉眼通過觀察T

2、/C線是否顯現(xiàn)定性分析三聚氰胺的存在狀況，結(jié)合掃描線條的顯色強(qiáng)度進(jìn)行三聚氰胺定量分析。實(shí)驗(yàn)中優(yōu)化了金納米粒子粒徑、NC膜類型和樣品墊緩沖液等關(guān)鍵參數(shù)，最佳實(shí)驗(yàn)條件下，9分鐘完成檢測，肉眼觀測靈敏度為100 ppb，在檢測范圍0-200 ppb能夠建立線性良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線(R2=0.9888)，本方法具有卓越的識別特異性，牛奶復(fù)雜樣品檢測應(yīng)用結(jié)果和標(biāo)準(zhǔn)品檢測結(jié)果高度一致。
　　(2)三聚氰胺增敏型免疫層析檢測技術(shù)建立
　　本研究

3、在傳統(tǒng)的基于競爭法層析試紙條的基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)，增加一個(gè)BSA抗體與金納米粒子制備的增敏元件構(gòu)建增敏型試紙條，將傳統(tǒng)型試紙條的靈敏度大大提高。本增敏型三聚氰胺檢測試紙條研究中，主要優(yōu)化了增敏金的粒徑，增敏元件上抗體的量和標(biāo)記pH值。在識別墊采用25 nm金納米粒子，增強(qiáng)墊采用15 nm金納米粒子，并采用賽多利斯CN95膜，可在9分鐘內(nèi)實(shí)現(xiàn)三聚氰胺的超靈敏快速檢測，肉眼檢測靈敏度為5 ppb，相比于傳統(tǒng)型方法靈敏度提升了20倍，標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測