反相高效液相色譜法同時(shí)檢測三聚氰胺、三聚氰酸、尿酸的方法研究.pdf

1、利用C18色譜柱-反相高效液相色譜法對(duì)三聚氰胺、三聚氰酸、尿酸進(jìn)行同時(shí)檢測的方法目前尚無研究,本文針對(duì)該方法的建立進(jìn)行了深入探討。分別以離子對(duì)緩沖溶液、磷酸鹽緩沖溶液作為流動(dòng)相,討論pH、流動(dòng)相比例、檢測波長對(duì)C18色譜柱分析三聚氰胺、三聚氰酸、尿酸的影響,最終初步建立了同時(shí)檢測這三種物質(zhì)的反相高效液相色譜法。并將該分析方法應(yīng)用于血漿、結(jié)石樣品,結(jié)果表明樣品基質(zhì)對(duì)分析目標(biāo)物干擾不嚴(yán)重,基本滿足分析需求。通過測試精密度、最低檢出限、最低定

2、量限、回收率對(duì)該分析方法的可靠性進(jìn)行了驗(yàn)證。
　　 研究內(nèi)容及結(jié)論如下:
　　 (1)液相條件的選擇與優(yōu)化:
　　 在乙腈作為有機(jī)相的前提下,以離子對(duì)緩沖溶液和磷酸鹽緩沖溶液分別作為水相體系,優(yōu)化研究了流動(dòng)相比例、檢測波長、流動(dòng)相pH對(duì)C18色譜柱分離三聚氰胺、三聚氰酸、尿酸的影響。結(jié)果表明以離子對(duì)緩沖溶液作為流動(dòng)相無法檢測到三聚氰酸,只能同時(shí)分析三聚氰胺與尿酸。流動(dòng)相為90％離子對(duì)緩沖溶液(辛烷磺酸鈉+檸檬酸,

3、pH=3.0)+10％乙腈,檢測波長由280nm在4.5min時(shí)切換為240nm,該條件下,三聚氰胺與尿酸能夠得到很好的分離;流動(dòng)相為100％磷酸鹽緩沖溶液(10mmol/L,pH=7.50),檢測波長為200nm,該條件下,C18色譜柱能夠很好的分離三聚氰胺、三聚氰酸及尿酸;
　　 (2)分析方法的應(yīng)用及驗(yàn)證:
　　 ①樣品前處理的選擇與優(yōu)化:本著簡便、低成本的宗旨確定一套前處理方案,提取溶劑采用乙腈水溶液。討論了不同

4、比例(1:1、2:1、3:1)的乙腈水溶液的處理效果,結(jié)果表明2:1的乙腈水溶液作為提取溶劑,不僅能夠很好地沉淀蛋白而且不浪費(fèi)乙腈。通過對(duì)實(shí)際樣品進(jìn)行測定發(fā)現(xiàn)目標(biāo)物受基質(zhì)干擾不嚴(yán)重,表明該前處理方法(超聲提取、離心分離、氮?dú)獯蹈?、純水?fù)溶)滿足分析需求。
　　 ②分析方法的驗(yàn)證:對(duì)某一血漿未知樣品進(jìn)行重復(fù)6次測定,計(jì)算保留時(shí)間與峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差,結(jié)果在0.48％～1.00％范圍內(nèi),表明該方法精密度很高;以信噪比為3確定三聚氰