反相高效液相色譜法同時檢測三聚氰胺、三聚氰酸、尿酸的方法研究.pdf

1、利用C18色譜柱-反相高效液相色譜法對三聚氰胺、三聚氰酸、尿酸進行同時檢測的方法目前尚無研究,本文針對該方法的建立進行了深入探討。分別以離子對緩沖溶液、磷酸鹽緩沖溶液作為流動相,討論pH、流動相比例、檢測波長對C18色譜柱分析三聚氰胺、三聚氰酸、尿酸的影響,最終初步建立了同時檢測這三種物質(zhì)的反相高效液相色譜法。并將該分析方法應用于血漿、結石樣品,結果表明樣品基質(zhì)對分析目標物干擾不嚴重,基本滿足分析需求。通過測試精密度、最低檢出限、最低定

2、量限、回收率對該分析方法的可靠性進行了驗證。
　　 研究內(nèi)容及結論如下:
　　 (1)液相條件的選擇與優(yōu)化:
　　 在乙腈作為有機相的前提下,以離子對緩沖溶液和磷酸鹽緩沖溶液分別作為水相體系,優(yōu)化研究了流動相比例、檢測波長、流動相pH對C18色譜柱分離三聚氰胺、三聚氰酸、尿酸的影響。結果表明以離子對緩沖溶液作為流動相無法檢測到三聚氰酸,只能同時分析三聚氰胺與尿酸。流動相為90％離子對緩沖溶液(辛烷磺酸鈉+檸檬酸,

3、pH=3.0)+10％乙腈,檢測波長由280nm在4.5min時切換為240nm,該條件下,三聚氰胺與尿酸能夠得到很好的分離;流動相為100％磷酸鹽緩沖溶液(10mmol/L,pH=7.50),檢測波長為200nm,該條件下,C18色譜柱能夠很好的分離三聚氰胺、三聚氰酸及尿酸;
　　 (2)分析方法的應用及驗證:
　　 ①樣品前處理的選擇與優(yōu)化:本著簡便、低成本的宗旨確定一套前處理方案,提取溶劑采用乙腈水溶液。討論了不同

4、比例(1:1、2:1、3:1)的乙腈水溶液的處理效果,結果表明2:1的乙腈水溶液作為提取溶劑,不僅能夠很好地沉淀蛋白而且不浪費乙腈。通過對實際樣品進行測定發(fā)現(xiàn)目標物受基質(zhì)干擾不嚴重,表明該前處理方法(超聲提取、離心分離、氮氣吹干、純水復溶)滿足分析需求。
　　 ②分析方法的驗證:對某一血漿未知樣品進行重復6次測定,計算保留時間與峰面積的相對標準偏差,結果在0.48％～1.00％范圍內(nèi),表明該方法精密度很高;以信噪比為3確定三聚氰