胚胎干細(xì)胞來源的間充質(zhì)干細(xì)胞歸巢及胚胎干細(xì)胞表面分子的研究.pdf

1、胚胎干細(xì)胞(ES)具有無限增殖能力，定向分化后可成為細(xì)胞移植的重要來源。ES定向分化后的細(xì)胞在體內(nèi)尤其是病理模型體內(nèi)的歸巢研究對ES的醫(yī)療應(yīng)用具有重要的理論和實踐參考價值。在本研究中，通過ROCK抑制劑Y-27632處理并在有血清體系下單層誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞分化為MSC(hES-MSC)，在體外生物素標(biāo)記hES-MSC后，將其異種移植到ICR小鼠體內(nèi)。36h后，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測和組織冰凍切片的免疫組織化學(xué)(IHC)鑒定，發(fā)現(xiàn)了hES-M

2、SC在ICR小鼠體內(nèi)早期歸巢的規(guī)律：在正常ICR小鼠體內(nèi)，hES-MSC傾向于歸巢到脾臟、骨髓和肺中，而幾乎不在肝臟中駐留：在CC14誘導(dǎo)急性肝損傷的ICR小鼠中，hES-MSC在骨髓、脾臟歸巢的平均數(shù)量分別減少了64.696和74.5％，而在損傷肝部位能發(fā)現(xiàn)大量歸巢的hES-MSC。同時還發(fā)現(xiàn)在正常ICR小鼠體內(nèi)隨著傳代次數(shù)增加，hES-MSC向脾臟、肝臟早期歸巢的能力會顯著性減弱，但是hES-MSC向損傷肝歸巢的能力卻不會受細(xì)胞代數(shù)

3、變化的顯著性影響。隨后，通過RT-PCR和冰凍切片的IHC檢測證明CXCR4在hES-MSC向損傷肝歸巢過程中具有重要作用，而損傷肝環(huán)境會促進(jìn)hES-MSC表達(dá)CXCR4和CXCR7，其中CXCR7會影響CXCR4與其配體SDF-1的結(jié)合。通過AFP和biotin的共定位，我們發(fā)現(xiàn)損傷肝環(huán)境還能在細(xì)胞移植早期就誘導(dǎo)hES-MSC表達(dá)肝向分化的指標(biāo)AFP，說明hES-MSC對損傷肝的治療作用與hES-MSC的原位肝向分化有關(guān)。在檢測了TN

4、F-a對hES-MSC歸巢的影響后，發(fā)現(xiàn)在體外TNF-a可以促進(jìn)hES-MSC表達(dá)CXCR4和CXCR7，TNF-a預(yù)處理的hES-MSC向ICR小鼠損傷肝臟早期歸巢的平均數(shù)量比未處理組提高了1.4倍。綜合以上的結(jié)果，可以得出這樣的結(jié)論：hES-MSC不僅能定向歸巢到ICR小鼠的損傷肝臟，而且還能在損傷部位進(jìn)行原位肝向分化，因此hES-MSC是理想的治療急性肝損傷的種子細(xì)胞，TNF-a預(yù)處理hES-MSC可以提高其向損傷肝早期歸巢的效率

5、從而提高治療效果。
　　 小鼠胚胎干細(xì)胞(mES)表面分子與細(xì)胞外信號系統(tǒng)和胞間通訊密切相關(guān)，對mES的鑒定、自我更新及分化機理的研究具有重要意義。通過全細(xì)胞免疫獲得針對mES特異性表面分子的兔單克隆抗體，利用改進(jìn)的免疫共沉淀方法純化細(xì)胞膜蛋白抗原，再結(jié)合LC-LTQ質(zhì)譜鑒定和商業(yè)化抗體的western blot驗證，獲得了針對Glut3在mES細(xì)胞膜表面的構(gòu)象表位的抗體。利用該抗體封閉Glut3可以抑制mES增殖，說明Glut