2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩185頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、生物膜(biofilms)是細(xì)菌吸附在有機或無機介質(zhì)上時,通過分泌含表面多糖、蛋白、DNA的細(xì)胞外基質(zhì),將菌群包圍其中所形成的復(fù)合體。在自然界中,細(xì)菌主要以生物膜形態(tài)存在。生物膜結(jié)構(gòu)為內(nèi)部菌群提供了物理性防護,生物膜中的菌體可形成互養(yǎng)共棲關(guān)系協(xié)同進行新陳代謝,遺傳物質(zhì)可橫向轉(zhuǎn)移使得進化更快,生物膜的形成對微生物提供了生態(tài)學(xué)優(yōu)勢。
   生物膜的形成受多種因素影響,外界環(huán)境條件如水文條件、吸附介質(zhì)、營養(yǎng)物質(zhì)、光照、溫度等,細(xì)菌內(nèi)在

2、的調(diào)節(jié)機制如密度感應(yīng)系統(tǒng)。細(xì)菌形成生物膜時,與浮游態(tài)相比多種基因差異表達(dá),差異表達(dá)的基因包括細(xì)菌吸附過程、密度感應(yīng)系統(tǒng)、代謝、應(yīng)答環(huán)境壓力、分子伴侶相關(guān)的基因。營養(yǎng)物質(zhì)對生物膜形成的影響主要體現(xiàn)在影響細(xì)菌的生長速率。生長速率可影響細(xì)菌多種特性,如代謝活性、耐藥性,吸附性和細(xì)胞外基質(zhì)的合成。環(huán)境溫度、pH對生物膜形成的影響與營養(yǎng)物質(zhì)相似,適宜的溫度、pH可加快生物膜細(xì)菌生長,提高吸附性。流體剪切力對生物膜結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定有很大作用,高剪切力使生

3、物膜更加致密,生物膜呈纖維細(xì)絲狀,而在層流狀態(tài)下呈單層細(xì)胞結(jié)構(gòu)。剪切力可影響物質(zhì)轉(zhuǎn)運和胞外多糖的產(chǎn)生。
   在前期實驗中利用蛋白組學(xué)研究方法,通過比較PseudomonasputidaF1蛋白表達(dá)的雙向凝膠電泳(2-DGE)圖譜,在不同碳源條件下生長的細(xì)胞中差異表達(dá)的蛋白質(zhì)經(jīng)胰酶消化以及基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間(Matrixassistedlaserdesorption/ionization-Timeofflight(MA

4、LDI-TOF)massspectrometry)質(zhì)譜分析,結(jié)果表明,盡管該細(xì)菌在降解甲苯和乙苯時利用同一個代謝途徑,代謝相關(guān)蛋白在微生物利用不同碳源時的表達(dá)量有所變化。差異表達(dá)蛋白可分為4類,代謝蛋白,轉(zhuǎn)運蛋白,適應(yīng)性相關(guān)蛋白以及其它類型蛋白。利用蛋白質(zhì)組學(xué)方法,比較惡臭假單胞菌浮游態(tài)與生物膜形成過程中許多基因差異表達(dá)。蛋白質(zhì)雙向凝膠電泳分析表明,與浮游態(tài)相比惡臭假單胞菌在生物膜形成早期有532個差異表達(dá)的蛋白,在生物膜形成晚期有43

5、5個。在早期差異表達(dá)的蛋白中,175個蛋白是特異表達(dá)的,61個蛋白表達(dá)有3倍差距。
   本文選取了遺傳背景清晰的E.coliBL21(DE3),用恒流器模擬自然界中流體環(huán)境,以低營養(yǎng)的M9鹽液為培養(yǎng)基,以玻璃羊毛為吸附介質(zhì)培養(yǎng)E.coliBL21(DE3),使其在玻璃羊毛上形成生物膜。通過顯微鏡觀察E.coliBL21(DE3)生物膜形成過程,分析出生物膜形成中的粘附聚集階段、微菌落形成階段和生物膜成熟階段。
   選

6、取游離態(tài)和生物膜態(tài)表達(dá)差異較大的三個蛋白,分別為腐胺/精胺轉(zhuǎn)運蛋白的底物結(jié)合亞基PotD,與代謝有關(guān)的蛋白TldD和谷氨酰胺合成酶,通過過量表達(dá),減量表達(dá)和基因敲除的方法,運用激光共聚焦顯微鏡,研究三個基因?qū).coliBL21(DE3)生物膜形成的影響。
   通過數(shù)據(jù)庫檢索獲得EcoliBL21(DE3)potD、tldD、glnA基因的全長序列。利用PCR擴增出potD、tldD、glnA基因,將potD基因與質(zhì)粒pET2

7、6b(+)連接構(gòu)建出potD基因過量表達(dá)載體pET26b(+)-fpotD,將tldD基因和glnA基因分別與質(zhì)粒pET28a(+)連接構(gòu)建出tldD基因和glnA基因的過量表達(dá)載體pET28a(+)-ftldD和pET28a(+)-fglnA。將三個基因的反義鏈連接入質(zhì)粒,構(gòu)建出反義核酸載體pET26b(+)-ipotD、pET28a(+)-itldD和pET28a(+)-iglnA,反義載體經(jīng)轉(zhuǎn)錄后生成目的基因的反義RNA,與目的基

8、因的mRNA進行互補結(jié)合后干擾目的基因的正常表達(dá),從而達(dá)到減量表達(dá)的效果;運用九-RED同源重組技術(shù)對目的基因進行敲除。
   將過量表達(dá)載體pET26b(+)-fpotD、pET28a(+)-ftldD和pET28a(+)-fglnA轉(zhuǎn)化E.coliBL21(DE3)進行誘導(dǎo)表達(dá),同時用SDS-PAGE驗證目的蛋白的表達(dá)。減量表達(dá)載體pET26b(+)-ipotD、pET28a(+)-itldD和pET28a(+)-iglnA

9、同時轉(zhuǎn)化E.coliBL21(DE3)進行反義RNA轉(zhuǎn)錄,運用Westernblotting驗證減量表達(dá)的效果。利用恒流器培養(yǎng)各蛋白過量表達(dá),減量表達(dá)菌株和缺失菌株形成生物膜,觀察各生物膜的形成狀況,分析目的基因?qū)ι锬ば纬傻挠绊憽?br>   SOS修復(fù)是指DNA受到嚴(yán)重的損傷時細(xì)胞處于危急狀態(tài)時被誘導(dǎo)的一種DNA修復(fù)方式,修復(fù)的結(jié)果只是能維持基因組的完整性,提高細(xì)胞的生成率,但留下的錯誤較多,故又稱為錯誤傾向修復(fù)(error-pr

10、onerepair),使細(xì)胞有較高的突變率。許多細(xì)菌,包括大腸桿菌,沙門氏菌等,能對DNA損傷或失速的DNA復(fù)制產(chǎn)生反應(yīng)即SOS反應(yīng)。SOS反應(yīng)有30多個基因參與,可使細(xì)菌增加DNA損傷耐受性及DNA修復(fù)能力。LexA蛋白是主要的SOS反應(yīng)調(diào)節(jié)劑,作為轉(zhuǎn)錄阻遏蛋白行駛功能直至DNA損傷激活RecA。RecA介導(dǎo)LexA自我消化,從而允許SOS基因表達(dá)。因此,RecA表達(dá)水平可以作為評價SOS反應(yīng)程度的可靠性指標(biāo)。多胺(腐胺、亞精胺和精胺

11、)是存在于所有生物體中的脂肪族陽離子。研究被證明多胺通過非共價鍵交互與蛋白質(zhì)、核酸、磷脂和其他酸性物質(zhì)相結(jié)合,能夠影響細(xì)胞膜的透性、基因表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)和細(xì)胞凋亡。因為他們的重要的監(jiān)管職能、生物合成、降解吸收,排泄的多胺是嚴(yán)格監(jiān)管為了保持適當(dāng)?shù)募?xì)胞水平。最近,多胺已被證明調(diào)解RecA的生產(chǎn),配合LexA控制SOS反應(yīng)調(diào)節(jié)子。研究人員發(fā)現(xiàn),groES,groEL,tldD,tldE,和gyrA的突變都能提高菌株對CcdB的耐受性,而且

12、在tld缺失菌株中,SOS反應(yīng)被誘導(dǎo)。雖然TldD和TldE被證明在含有pMccB17質(zhì)粒的菌株中,與抗生素的分泌有關(guān),但是,tldD和tldE基因位于染色體上,而不是質(zhì)粒上,而且,除了TldE蛋白之外,沒有研究表明其他蛋白質(zhì)與TldD有相似的作用。為了研究PotD和TldD與SOS系統(tǒng)的關(guān)系,實驗選取recA,sfiA,oxyR,groES,groEL,gyrA六個與SOS反應(yīng)相關(guān)的基因,以16srRNA為內(nèi)參,利用RT-PCR分析六

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論