昆蟲細(xì)胞BTI-Tn5B1-4及其克隆株的無血清培養(yǎng)和特性的研究.pdf

1、本論文以Sf-9為對(duì)照，對(duì)目前國際上廣泛應(yīng)用的BTI-Tn5B1-4細(xì)胞及其克隆株H5CL-G和H5CL-F分別進(jìn)行了無血清馴化和培養(yǎng)，比較了細(xì)胞系在無血清培養(yǎng)基Sf-900Ⅲ和有血清培養(yǎng)基TNM-FH中的細(xì)胞形態(tài)、生長速率、病毒產(chǎn)量和重組蛋白表達(dá)水平，主要結(jié)果如下:
　　 1、在Sf-900Ⅲ中，細(xì)胞形態(tài)都發(fā)生了改變，BTI-Tn5B1-4和H5CL-G的梭形細(xì)胞比例都有不同程度的下降，細(xì)胞變的短而粗，圓形細(xì)胞比例增加，細(xì)胞略

2、變大。H5CL-F的梭形細(xì)胞完全變?yōu)閳A形細(xì)胞，直徑為16.65±1.36μm，而在TNM-FH中梭形細(xì)胞比例為94.6％，大小為57.49±1.85μm×14.15±2.40μm，圓形細(xì)胞比例為5.4％，直徑為15.59±1.26μm。Sf-9細(xì)胞比在TNM-FH培養(yǎng)的略大。
　　 2、細(xì)胞在兩種培養(yǎng)基的生長曲線測(cè)定顯示，BTI-Tn-5B1-4、H5CL-G、H5CL-F和Sf-9在Sf-900Ⅲ中生長速度快，倍增時(shí)間短，群體

3、倍增時(shí)間分別為18.5h、18.8h、19.0h和21.7h，而在TNM-FH中它們的群體倍增時(shí)間分別為21.9h、21.69h、21.87h和25.4h。
　　 3、用AcMNPV-1A病毒分別對(duì)兩種培養(yǎng)基中的BTI-Tn-5B1-4、H5CL-G和H5CL-F細(xì)胞進(jìn)行侵染。結(jié)果表明，細(xì)胞系在兩種培養(yǎng)基的病毒感染率都在90％以上，多角體產(chǎn)量兩種培養(yǎng)基間無明顯差異。細(xì)胞系BTI-Tn-5B1-4、H5CL-G和H5CL-F在Sf

4、-900Ⅲ中的多角體產(chǎn)量大約為Sf-9在TNM-FH的2～3倍。
　　 4、重組蛋白β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）和堿性磷酸酶(secretedalkalinephosphatase，SEAP)的表達(dá)測(cè)定，結(jié)果表明，兩種培養(yǎng)基間的β-半乳糖苷酶表達(dá)量在細(xì)胞系BTI-Tn-5B1-4和Sf-9均無明顯差異;細(xì)胞系H5CL-G和H5CL-F在Sf-900Ⅲ中表達(dá)量高于在TNM-FH的表達(dá)量，其中H5CL-F在Sf-