條件培養(yǎng)基對(duì)昆蟲(chóng)細(xì)胞BTI-Tn5B1-4及克隆株特性的影響.pdf

1、本論文對(duì)目前國(guó)際上廣泛應(yīng)用的BTI-Tn5B1-4細(xì)胞及其克隆株H5CL-B、H5CL-F分別進(jìn)行了條件培養(yǎng)基的培養(yǎng).比較了細(xì)胞在含條件培養(yǎng)基和不含條件培養(yǎng)基SF900Ⅲ無(wú)血清培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)速率、病毒產(chǎn)量和重組蛋白表達(dá)水平.主要結(jié)果如下:
　　 1、細(xì)胞在兩種培養(yǎng)基的生長(zhǎng)曲線測(cè)定顯示，BTI-Tn-5B1-4、H5CL-B和H5CL-F在含條件培養(yǎng)基的Sf-900Ⅲ中生長(zhǎng)速度快，群體倍增時(shí)間短，分別為25.5h、25.5h、21

2、.9h，而在Sf-900Ⅲ中它們的群體倍增時(shí)間分別為30.3h、28.7h、24.2h。
　　 2、用AcMNPV-1A病毒分別對(duì)兩種培養(yǎng)基中的BTI-Tn-5B1-4、H5CL-B和H5CL-F細(xì)胞進(jìn)行侵染。結(jié)果表明，細(xì)胞系在兩種培養(yǎng)基的病毒感染率都在93％以上，多角體產(chǎn)量?jī)煞N培養(yǎng)基間無(wú)明顯差異。
　　 3、重組蛋白β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）和堿性磷酸酶(secretedalkalinephosp

3、hatase，SEAP)的表達(dá)測(cè)定，結(jié)果表明，兩種培養(yǎng)基間的β-半乳糖苷酶表達(dá)量無(wú)明顯差異;細(xì)胞系BTI-Tn-5B1-4、H5CL-B和H5CL-F在CM中表達(dá)量高于在Sf-900Ⅲ的表達(dá)量，其中H5CL-F在CM中表達(dá)量最高（3.98×104IU/mL），大約比它在Sf-900Ⅲ的表達(dá)量提高10％。三種細(xì)胞系的堿性磷酸酶在CM中的表達(dá)量明顯高于在Sf-900Ⅲ中的表達(dá)量，其中BTI-Tn-5B1-4在CM的表達(dá)水平最高達(dá)(8.62I