兩棲類抗菌肽Temporin-1CEa及其改造肽對(duì)新生血管生成和黑色素瘤轉(zhuǎn)移侵襲影響的研究.pdf

1、分類號(hào)：密級(jí)：學(xué)校代碼：10165學(xué)號(hào)：201211000930遣掌師耗大學(xué)碩士學(xué)位論文兩棲類抗菌肽Temporin1OEa及其改造肽對(duì)新生血管生成和黑色素瘤轉(zhuǎn)移侵襲影響的研究作者姓名：學(xué)科、專業(yè)：研究方向：導(dǎo)師姓名：張亮有機(jī)化學(xué)多肽生物化學(xué)王澈副教授尚德靜教授2015年05月遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要黑色素瘤(melanoma)是一種高度惡化并具有快速轉(zhuǎn)移和高度侵襲特性的腫瘤，該瘤進(jìn)展迅速，預(yù)后極差，并對(duì)一般的化療藥物具有耐受性，因

2、此缺乏有效的治療藥物。近年來，具有抗癌活性的陽(yáng)離子抗菌肽由于其獨(dú)特的作用機(jī)制，逐漸受到人們的廣泛關(guān)注。我們前期的研究工作發(fā)現(xiàn)，來自于中國(guó)林蛙皮膚分泌物的陽(yáng)離子抗菌肽TemporinlCEa具有較好的選擇性抗癌活性。在本論文中，我們將對(duì)Temporin1CEa及其六個(gè)改造肽的黑色素瘤選擇性殺傷作用進(jìn)行考察，并進(jìn)一步對(duì)其抗腫瘤血管新生和抑制腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲的活性進(jìn)行了初步的評(píng)價(jià)。我們首先利用MTT法考察了Temporin1CEa及其改造肽對(duì)人

3、黑色素瘤A375細(xì)胞和人永生化表皮Hacat細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Temporin1CEa及其改造肽對(duì)A375細(xì)胞具有不同程度的殺傷作用，其作用強(qiáng)度依次為L(zhǎng)K2(6)AN(2L)LK2(6)A(L)Temporin1CEaLKlLK3LK2(6)LK2(5)，其中Temporin1CEa、LKl和LK2(6)A(L)對(duì)腫瘤細(xì)胞具有較好的選擇性。此外，通過AnnexinVFITC單染，采用流式細(xì)胞儀對(duì)A375細(xì)胞和Hacat細(xì)胞

4、表面的負(fù)電荷成分磷脂酰絲氨酸(PhosphatidyIserine，PS)含量進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果顯示A375細(xì)胞表面PS含量明顯高于Hacat細(xì)胞，這可能是Temporin1CEa及其改造肽選擇性殺傷A375細(xì)胞的機(jī)制之一。同時(shí)，我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，加入NaCl03抑制細(xì)胞表面硫酸基團(tuán)的表達(dá)后，能夠明顯增強(qiáng)Temporin1CEa、LKl和LK2(6)A(L)的抗腫瘤活性，顯示細(xì)胞表面硫酸基團(tuán)能夠減弱抗菌肽與腫瘤細(xì)胞之間的相互作用。在明

5、確了Temporin1CEa及其改造肽對(duì)人黑色素瘤A375細(xì)胞的選擇性殺傷作用之后，我們又進(jìn)一步對(duì)其抗黑色素瘤轉(zhuǎn)移和侵襲的活性進(jìn)行了考察。Transwell遷移／侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Temporin1CEa及其改造肽LKl和LK2(6)A(L)對(duì)A375細(xì)胞的遷移／侵襲具有明顯的抑制作用，其作用強(qiáng)弱順序?yàn)門emporin1CEaLK2(6)A(L)LKl。此外，采用ELISA方法檢測(cè)人基質(zhì)金屬蛋白酶2(Matrixmetalloprote

6、inase2，MMP2)和人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VascularEndothelialGrowthFactor，V】三GF)表達(dá)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Temporin01CEa、LKl和LK2(6)A(L)能夠抑制A375細(xì)胞MMP2和VEGF的釋放，且抑制效果呈劑量依賴方式，提示Temporin1CEa及其改造肽的腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲抑制活性可能與降低黑色素瘤細(xì)胞MMP2和VEGF的表達(dá)和釋放有關(guān)。由于腫瘤的遷移和侵襲與血管新生密切相關(guān)，因此，我們