抗菌肽Temporin-1CEa降低MCF-7-Adr細(xì)胞耐藥性的作用研究.pdf

1、抗菌肽Temporin-1CEa是從中國(guó)林蛙皮膚分泌物中提取得到的一種陽離子膜活性多肽。研究發(fā)現(xiàn)大多數(shù)帶正電的陽離子抗菌肽可以通過靜電吸引作用與腫瘤細(xì)胞膜結(jié)合，發(fā)揮抗癌作用，且不易產(chǎn)生耐藥性。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室對(duì)乳腺癌耐藥細(xì)胞的初步研究，我們發(fā)現(xiàn)乳腺癌耐藥MCF-7/Adr細(xì)胞高表達(dá)多藥耐藥蛋白P．糖蛋白（P-glycoprotein，P-gP），Temporin-1 CEa不僅本身對(duì)乳腺癌耐藥MCF-7/Adr細(xì)胞有選擇性抑制作用，而且還能

2、降低MCF-7/Adr細(xì)胞對(duì)阿霉素的耐藥性，增強(qiáng)阿霉素的抑癌效果。因此本論文主要對(duì)Temporin-1CEa降低乳腺癌MCF-7/Adr細(xì)胞耐藥性的作用機(jī)制進(jìn)行了探討。
　　首先，我們研究了Temporin-1CEa對(duì)MCF-7/Adr細(xì)胞膜的影響;通過激光共聚焦顯微鏡形態(tài)學(xué)觀察及細(xì)胞跨膜電位檢測(cè)，Temporin-1CEa在15μM以下，細(xì)胞膜電位未見去極化，細(xì)胞膜通透性沒有發(fā)生明顯變化，當(dāng)肽的濃度達(dá)到15μM、20μM時(shí)，MC

3、F-7/Adr細(xì)胞開始發(fā)生去極化，膜通透性增加，PI進(jìn)入細(xì)胞核。而在本實(shí)驗(yàn)室前期研究中，10μM的Temporin-1CEa已經(jīng)顯著降低MCF-7/Adr細(xì)胞對(duì)阿霉素的耐藥性，這提示Temporin-1 CEa逆轉(zhuǎn)耐藥的作用機(jī)制可能不涉及細(xì)胞膜通透性的改變，低濃度的Temporin-1 CEa可能更多地通過其他機(jī)制降低腫瘤細(xì)胞的耐藥性。
　　其次，我們研究了抗菌肽Temporin-1 CEa對(duì)MCF-7/Adr細(xì)胞膜P-gP外排功

4、能的影響;P-gP底物外排實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，5-15μM的Temporin-1CEa作用于細(xì)胞后，羅丹明123和阿霉素在MCF-7/Adr細(xì)胞內(nèi)的積累量增加;P-gP ATP酶活性測(cè)定結(jié)果顯示5-15μM的Temporin-1CEa可以激活P-gP ATP酶活性，由此說明抗菌肽Temporin-1CEa可以通過激活P-gP ATP酶抑制P-gP的外排功能。
　　最后，我們通過實(shí)時(shí)定量PCR和免疫印跡實(shí)驗(yàn)考察了Temporin-1CEa

5、不同濃度和不同時(shí)間對(duì)MCF-7/Adr細(xì)胞P-gP基因和蛋白表達(dá)水平的影響;實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示5-15μM的Temporin-1CEa在作用細(xì)胞1小時(shí)后對(duì)P-gP基因和蛋白的表達(dá)稍有抑制，而15μM的Temporin-1CEa在作用時(shí)間延長(zhǎng)后能夠更為顯著地抑制P-gP基因和蛋白的表達(dá)。
　　綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，說明了Temporin-1CEa降低細(xì)胞耐藥的機(jī)制:在低濃度、作用早期是以影響細(xì)胞表面P-gP外排功能為主，而中等濃度下則可以隨時(shí)