大環(huán)內(nèi)酯類化合物逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞(MCF-7-adr)多藥耐藥性的研究.pdf

1、惡性腫瘤是目前人類死亡的一個(gè)重要原因，化學(xué)藥物治療在腫瘤的治療中占有非常重要的地位。但由于在臨床化療過程中腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的多藥耐藥（multidrug resistance MDR），使化療藥物難以起效甚至無效?？梢姡晒δ孓D(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞MDR直接關(guān)系到腫瘤患者的化療效果。然而，目前所研究的逆轉(zhuǎn)MDR藥物，多數(shù)副作用大、效果有限，至今仍未找到一種理想的逆轉(zhuǎn)藥物。近年來，大環(huán)內(nèi)酯類的藥物應(yīng)用越米越廣泛，并且毒副作用小、療效佳，可能成為一種理想的

2、MDR逆轉(zhuǎn)劑。因此，本實(shí)驗(yàn)選用5種大環(huán)內(nèi)酯類藥物研究其對腫瘤細(xì)胞人乳腺癌耐阿霉素細(xì)胞系（MCF-7/adr）在體外及裸鼠體內(nèi)的逆轉(zhuǎn)作用及相應(yīng)機(jī)制，旨在開發(fā)一種有效的腫瘤MDR逆轉(zhuǎn)藥物。
　　 首先在體外采用濃度梯度聯(lián)合高濃度反復(fù)間歇誘導(dǎo)法構(gòu)建人乳腺癌耐阿霉素細(xì)胞系（MCF-7/adr），測定耐藥指數(shù)；采用MTT[3-（4，5-dimethylthiazol-2-yl）-2，5-diohenyltetrazolium bromid

3、e]方法測定逆轉(zhuǎn)藥物的逆轉(zhuǎn)作用。其次研究試驗(yàn)藥物的逆轉(zhuǎn)MDR的機(jī)制，通過檢測經(jīng)藥物預(yù)處理的MCF-7/adr細(xì)胞中羅丹明123和ADR積累及羅丹明123外排的變化，探討藥物能否與P-gp結(jié)合、抑制其泵出功能來逆轉(zhuǎn)MCF-7/adr細(xì)胞的MDR；通過RT-PCR半定量及流式細(xì)胞儀法檢測藥物作用MCE-7/adr細(xì)胞后MDR1基因和MRP1基因及P-gp蛋白的表達(dá)。最后為進(jìn)行實(shí)驗(yàn)藥物的體內(nèi)逆轉(zhuǎn)MDR實(shí)驗(yàn)研究，我們還測定試驗(yàn)藥物對CYP1A2

4、（P450酶）活性的影響及對正常人成纖維細(xì)胞及外周血單個(gè)核細(xì)胞的毒性作用；并在體外構(gòu)建人乳腺癌MCF-7/adr移植瘤Balb/c裸鼠模型，選取體外逆轉(zhuǎn)MDR作用最強(qiáng)的一種藥物作用后測量裸鼠的平均生存時(shí)間和腫瘤體積。
　　 結(jié)果表明，在體外構(gòu)建的耐藥細(xì)胞系耐藥指數(shù)高達(dá)61倍，并檢測到多拉菌素、米爾貝A4、尼莫克汀、米爾貝β14和次級米爾貝D在濃度為5μmol/L時(shí)，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為28.93、22.23、16.64、13.50、1

5、0.59倍，逆轉(zhuǎn)作用均高于維拉帕米陽性對照組。此外，試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組較對照組MCF-7/adr細(xì)胞中的羅丹明123和ADR積累明顯增加，而羅丹明123外排減少（P<0.05），并表現(xiàn)出劑量依賴與時(shí)間依賴關(guān)系，其中，疏水性最強(qiáng)的多拉菌素作用效果最為明顯。同時(shí)，經(jīng)藥物逆轉(zhuǎn)作用后明顯降低了MDR1基因、P-gp和MRP1基因的表達(dá)（P<0.05）。進(jìn)一步試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)藥物顯示低濃度的試驗(yàn)藥物對CYP1A2代謝活性無影響（P>0.05），且對正

6、常人成纖維細(xì)胞及外周血單個(gè)核細(xì)胞的無毒劑量IC10分別為（4.545±0.876）μmol/L、（4.029±0.638）μmol/L；將多拉菌素與ADR聯(lián)合應(yīng)用后可顯著延長荷人耐藥乳腺癌細(xì)胞MCF-7/adr移植瘤裸鼠的平均生存時(shí)間，抑制實(shí)體移植瘤的增長（P<0.05）。
　　 綜上，本研究成功建立了MCF-7細(xì)胞的多藥耐藥細(xì)胞系，并發(fā)現(xiàn)5種大環(huán)內(nèi)酯類藥物體外可以有效地逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的MDR，主要通過兩種機(jī)制：一是與P-gp競爭