亮菌漆酶的發(fā)酵生產(chǎn)、酶學(xué)性質(zhì)及應(yīng)用基礎(chǔ)研究.pdf

1、漆酶(Laccase，EC 1.10.3.2)是一種含銅的多酚氧化酶，作用底物廣泛，具有重要的工業(yè)價(jià)值。本文以亮菌作為產(chǎn)漆酶的出發(fā)菌，對(duì)亮菌漆酶的發(fā)酵生產(chǎn)、分離純化、酶學(xué)性質(zhì)及應(yīng)用進(jìn)行研究，主要結(jié)果如下:
　　以發(fā)酵液中的亮菌胞外漆酶酶活力為試驗(yàn)指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法對(duì)亮菌液體發(fā)酵產(chǎn)漆酶的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化篩選。結(jié)果表明，最佳培養(yǎng)基碳氮源組合為葡萄糖0.5％、淀粉1.5％、硫酸銨0.2％、酵母浸膏1.5％，在此條件下亮菌漆酶酶

2、活力達(dá)4.97U/ml;最佳培養(yǎng)條件為裝液量75ml、接種量6％、菌齡7d、培養(yǎng)時(shí)間10d，在此條件下亮菌漆酶酶活力達(dá)5.35U/ml;在最優(yōu)培養(yǎng)條件下添加愈創(chuàng)木酚等誘導(dǎo)劑，漆酶酶活力最高達(dá)7.84U/ml。綜合比較，亮菌漆酶的酶活力隨著發(fā)酵條件的改善在逐漸提高，但提高幅度極小，最高酶活力仍不理想。以幾種中藥渣和麥麩為主料，采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)的方法對(duì)亮菌進(jìn)行固體發(fā)酵，幾種中藥渣以白芍藥渣為碳源產(chǎn)漆酶最佳，并且其最適培養(yǎng)條件為葡萄糖

3、0.9％，白芍麩皮比例3∶7，溫度25℃，含水量65％，接種量11％，在優(yōu)化培養(yǎng)條件后，漆酶酶活力較初始培養(yǎng)基提高了19倍。
　　亮菌固體發(fā)酵后粗酶液經(jīng)過(guò)硫酸銨鹽析、DEAE-cellulose柱層析，活力回收率為26.7％，得到電泳純的亮菌漆酶，SDS-PAGE法證實(shí)其分子量約為55.4kD。亮菌漆酶最適反應(yīng)溫度為55℃、最適反應(yīng)pH為4.0，在pH4.5的偏酸性環(huán)境中，酶活力較高，活性較穩(wěn)定。酸根陰離子和金屬陽(yáng)離子對(duì)酶活力都有

4、不同程度的影響，高濃度的陰離子對(duì)漆酶酶活力影響較大，尤其試驗(yàn)中高濃度的CO32-影響最大;高濃度的Cu2+能明顯降低漆酶酶活力，而Na+和Mg2+對(duì)漆酶的酶活力影響不大。
　　初步研究亮菌漆酶粗酶液降解氯酚類(lèi)物質(zhì)的能力，結(jié)果表明，亮菌漆酶能有效降解2，4-二氯苯酚、2-氯苯酚、4-氯苯酚，在最適條件下，2，4-二氯苯酚、2-氯苯酚、4-氯苯酚的降解率分別為95.6％、85.7、83％，在氯酚類(lèi)污染物降解和環(huán)境保護(hù)方面具有潛在的應(yīng)用