白腐菌漆酶發(fā)酵優(yōu)化及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、漆酶是一類含銅的氧化還原酶，能廣泛用于污染物降解、生物質(zhì)能、生物材料、制漿造紙等領(lǐng)域，具有較好的應(yīng)用潛力。白腐菌是漆酶最主要的來源之一，但其所分泌的漆酶往往由于產(chǎn)量低而不能滿足工業(yè)需求。為提高白腐菌漆酶發(fā)酵產(chǎn)量，本研究以白腐菌Physisporinus vitreus PF18和Trametes versicolor60-1為研究對象，分別對其漆酶發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，獲得漆酶液體深層發(fā)酵的最佳條件，在此基礎(chǔ)上，分離純化T.versico

2、lor60-1漆酶同工酶，并對其酶學(xué)性質(zhì)及染料降解作用進(jìn)行初步研究，主要結(jié)論如下：
　　采用單因素試驗和四因素四水平正交試驗對P.vitreus PF18液體深層發(fā)酵漆酶培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，最佳發(fā)酵條件為：葡萄糖50g/L，麩皮10g/L，胰蛋白胨7g/L，黃豆粉3.5g/L，發(fā)酵第4天加入9mM藜蘆醇。發(fā)酵8天后，優(yōu)化的漆酶產(chǎn)量由0.96U/mL提升至34.6U/mL，提高了36倍；采用四因素三水平正交試驗對T.versicolor

3、60-1液體深層發(fā)酵漆酶培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，最佳發(fā)酵條件為：葡萄糖20g/L，胰蛋白胨10g/L，玉米秸稈10g/L，在發(fā)酵4天后添加2mM Cu2+和3mM p-Cumaricacid。發(fā)酵12天后，優(yōu)化的漆酶產(chǎn)量由0.189U/mL提高至11.01U/mL，提高了58倍。T.versicolor60-1和P.vitreus PF18發(fā)酵粗酶液均能有效染料孔雀石綠，2小時脫色率分別為74.9％和86.5%。
　　T.versicol

4、or60-1粗酶液經(jīng)過硫酸銨鹽析、DEAE-Sepharose陰離子交換層析、Phenyl-Sepharose疏水層析純化后分離得到三個藍(lán)色漆酶同工酶：LacⅠ、LacⅡ、LacⅢ，表觀分子量分別為：77kDa、81kDa和91kDa。以ABTS為底物時，LacⅠ、LacⅡ、LacⅢ的最適pH均為2.2左右，最適溫度分別為80℃、65℃和65℃。溫度穩(wěn)定性LacⅠ>LacⅡ>LacⅢ。Cu2+對LacⅠ和LacⅡ有一定的激活作用，而對L