靶向沉默RACK1基因?qū)θ朔蜗侔┞闶笃は乱浦擦黾盎熋舾行缘挠绊?pdf

1、目的：
　　通過(guò)裸鼠皮下移植瘤的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，研究沉默活化的蛋白激酶C受體1（receptor for activated C kinase1,RACK1）表達(dá)對(duì)于肺腺癌腫瘤生長(zhǎng)速度及其對(duì)順鉑、紫杉醇兩種化療藥物敏感性的影響。
　　方法：
　?。?）使用人肺腺癌A549細(xì)胞株建立裸鼠皮下移植瘤模型。
　　（2）待腫瘤直徑為0.3cm-0.5cm時(shí)，將荷瘤裸鼠隨機(jī)分成3組，每組18只，分別于瘤內(nèi)注射生理鹽水（Contr

2、ol組）、空載質(zhì)粒-脂質(zhì)體復(fù)合物（Vector-shRNA組）及shRNA-RACK1質(zhì)粒-脂質(zhì)體復(fù)合物（RACK1-shRNA組）。
　?。?）轉(zhuǎn)染成功后，將RACK1-shRNA組、Vector-shRNA組和Control組三組根據(jù)注射藥物不同每組分為生理鹽水組、順鉑組和紫杉醇組，每組6只，腹腔灌注化療，隔日給藥。
　?。?）觀察三組裸鼠轉(zhuǎn)染前后與化療前后的皮下移植瘤體積變化，繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線，并用western-bl

3、ot檢測(cè)各組腫瘤組織中RACK1蛋白的表達(dá)。
　?。?）于28d時(shí)處死裸鼠，剝離腫瘤。一部分移植瘤組織置于4％多聚甲醛固定液中浸泡，石蠟包埋后行HE染色，一部分移植瘤組織置于液氮中保存，行Western Blot檢測(cè)。
　　結(jié)果：
　?。?）成功建立人肺腺癌A549細(xì)胞株裸鼠皮下移植瘤模型，經(jīng)HE染色病理學(xué)檢查，證實(shí)模型具有類似人肺腺癌的病理學(xué)特征。
　?。?）移植瘤形成后第28天，RACK1-shRNA組皮下移

4、植瘤體積為197.04±39.24mm3，重量為0.17±0.04g；Vector-shRNA組皮下移植瘤體積為275.35±61.71mm3，重量為0.27±0.06g；Control組皮下移植瘤體積為298.66±49.29mm3，重量為0.28±0.06g；RACK1-shRNA組較Vector-shRNA組和Control組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=6.56，P<0.05）。
　　（3）Western blot結(jié)果顯示，RAC

5、K1-shRNA組、Vector-shRNA組和Control組中RACK1相對(duì)表達(dá)量分別為（0.21±0.11），（0.76±0.08）及（0.83±0.05）。與Vector-shRNA組和Control組相比，RACK1-shRNA組RACK1蛋白的表達(dá)量顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=97.53，P＜0.05），Vector-shRNA組和Control組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　?。?）在給予順鉑腹腔灌注

6、化療后發(fā)現(xiàn)，RACK1-shRNA組皮下移植瘤體積為144.56±25.94mm3，重量為0.08±0.05g；Vector-shRNA組皮下移植瘤體積為220.58±38.39mm3，重量為0.20±0.09g；Control組皮下移植瘤體積為264.34±44.87mm3，重量為0.25±0.04g；較Vector-shRNA組和Control組中注射順鉑的裸鼠相比，于14天、21天、28天RACK1-shRNA組腫瘤生長(zhǎng)速度相對(duì)緩

7、慢，于28天處死裸鼠，皮下移植瘤重量相對(duì)較小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F14天=6.03，F(xiàn)21天=10.25，F(xiàn)28天=15.90， F瘤重=12.27，P<0.05）。
　?。?）在給予紫杉醇腹腔灌注化療后發(fā)現(xiàn)，RACK1-shRNA組皮下移植瘤體積為150.54±24.82mm3，重量為0.09±0.03g；Vector-shRNA組皮下移植瘤體積為238.42±46.17mm3，重量為0.24±0.07g；Control組皮下移

8、植瘤體積為239.63±22.58mm3，重量為0.27±0.05g；較Vector-shRNA組和Control組中注射紫杉醇的裸鼠相比，于14天、21天、28天RACK1-shRNA組腫瘤生長(zhǎng)速度相對(duì)緩慢，于28天處死裸鼠，皮下移植瘤重量相對(duì)較小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F14天=14.43，F(xiàn)21天=16.04，F(xiàn)28天=14.42， F瘤重=18.05，P<0.05）。
　　結(jié)論：
　?。?）靶向沉默RACK1基因?qū)β闶蠓?/p>