大黃素和槲皮素對LRRK2突變致PD果蠅的治療作用探討.pdf

1、目的:
　　LRRK2是近年來受關注較多的一個帕金森病(PD)相關基因。是一個會導致遺傳性帕金森病的最為常見的常染色體顯性遺傳帕金森病基因，可能導致了約7％家族遺傳性帕金森病，它的突變與散發(fā)性PD也有一定的聯系，遺傳性突變引起的LRRK2激酶活性增高是目前比較公認的帕金森病發(fā)病機制之一，并正在指導著臨床藥物的開發(fā)。大黃素和槲皮素在我們實驗室的前期實驗已證明是在體外能有效抑制LRRK2激酶活性的具有激酶活性抑制作用的中草藥制劑。本實

2、驗選用相應的轉基因果蠅品系對大黃素和槲皮素進行進一步實驗研究，檢驗其在體實驗時有無激酶活性抑制作用，并選出作用最好的濃度值，進一步實驗，研究其作用的途徑。
　　方法:
　　1．使用Ddc-GAL4;UAS-LRRK2-G2019S品系果蠅(簡稱GS2)，給予不同濃度的大黃素和槲皮素，與對照組比較，檢測生命周期和運動能力，篩選出合適的藥物濃度，觀察生命周期和運動能力出現重大變化的時間段，進入下一步實驗。
　　2．使用GS

3、2品系果蠅作為實驗組，Ddc-Gal4品系果蠅(簡稱GAL4)作為陰性對照組。飼養(yǎng)至一定時間，取果蠅頭部，提取蛋白，用Western blot檢測p-LRRK2、Nrf2、GCLC、p-p38MAPK、ERK、TH等表達的變化，確定大黃素和槲皮素提高LRRK2突變致PD果蠅的壽命和運動能力的可能途徑。
　　結果:
　　1．大黃素實驗組：
　　生命周期：濃度為100μmol/l的大黃素果蠅壽命延長最明顯。并且40天左右曲

4、線出現明顯改變。半數生存時間顯示濃度為100μmol/l的大黃素實驗組有意義。
　　運動能力：濃度為100μmol/l的大黃素果蠅的運動能力（攀爬）改善最明顯，數據統(tǒng)計在第四、第五、第六、第七周有意義。在第六周意義更為明顯。
　　2．槲皮素實驗組：
　　生命周期：濃度為10μmol/l的實驗組和濃度為1μmol/l的實驗組的效果是有重合的，但在40天左右時，10μmol/l實驗組的效果明顯優(yōu)于1μmol/l實驗組。各組

5、曲線均在40天左右出現明顯改變。半數生存時間顯示濃度為1μmol/l和10μmol/l的實驗組數據都有意義。
　　運動能力：濃度為10μmol/l的槲皮素實驗組的效果最明顯。數據統(tǒng)計在第三、第四、第五、第六周皆有意義，且在第六周意義更為顯著。
　　3．使用大黃素、槲皮素后磷酸化LRRK2的表達量降低；Nrf2和GCLC的表達量均有增加；磷酸化p38MAPK的表達量降低。ERK的表達量要低于未用藥實驗組。TH的表達量增高。

6、r>　　結論:
　　1．給藥濃度為100μmol/l的大黃素和10μmol/l的槲皮素的效果相對比較明顯。生命周期和運動能力都是在40天左右，也即是在第六周時出現明顯改變。
　　2．大黃素和槲皮素可能是經由：
　　通過激活Nrf2，引起Nrf2的核轉移，繼而提高GCLC基因表達，增加GSH的表達，產生抗氧化作用，提高細胞抗氧化應激的能力，保護了DA神經元功能，對PD起到一定的治療作用。
　　通過抑制p38MAPK