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文檔簡介
1、目的:
通過初步建立復雜性的腎內(nèi)正壓灌注、負壓吸引的動物實驗模型,來對復腎盂正壓灌注、負壓吸引灌流進行觀察,以研究不同的壓力變化對腎單位細微結(jié)構(gòu)的具體影響;以此作為基礎,探討現(xiàn)階段腔鏡手術(shù)的時候,腎內(nèi)壓力的合理安全范圍。
方法:
第一部分:
購買健康實驗用豬總共10只,在全身麻醉的狀態(tài)下進行實驗操作:留置4F輸尿管導管在實驗豬腎的盂輸尿管移行部;5只實驗豬使用特制壓力調(diào)節(jié)裝置,將腎的正壓灌注壓力分
2、別維持在50mmHg、100mmHg、150mmHg、200mmHg四個階段,5只實驗豬進行負壓吸引操作,使用特制壓力調(diào)節(jié)裝置,將負壓吸引力分別維持在-5mmHg、-10mmHg、-15mmHg、-20mmHg四個階段;以上壓力在保持10分鐘后,使用活檢穿刺針分別取下實驗用豬腎臟的腎上盞、中盞、下盞三處,組織厚度約為15mm,再固定后制作病理切片;
第二部分:
在第一部分的基礎之上,恢復腎內(nèi)的壓力在正常腎內(nèi)壓10分鐘
3、之后,再分別將腎內(nèi)的正壓灌注以及負壓吸引的壓力分別調(diào)整至50mmHg、100mmHg、150mmHg、200mmHg,和-5mmHg、-10、mmHg、-15mmHg、-20mmHg;再次保持以上各級別壓力10分鐘后,使用同樣方法采集腎臟標本;再次重復以上操作:恢復腎內(nèi)正常壓力10分鐘后,再重復一次實驗操作,并再次獲得腎臟標本。
第三部分:
完成第二部分實驗之后,取得150mmHg、200mmHg、-15mmHg、-
4、20mmHg的實驗用豬雙腎,取部分腎組織,其中需要兼顧部分腎皮質(zhì)、腎髓質(zhì)均有的組織,運用免疫組化的方法,檢測在不同壓力的情況下,細胞因子:TNF-α和TGF-β1的表達發(fā)生了什么變化。
第四部分:
使用電子顯微鏡,觀察在各個級別的壓力變化,時間的累積下,腎小球、腎小囊、近曲腎小管、腎間質(zhì)的具體變化情況。
結(jié)果:
當腎內(nèi)正壓灌注壓力維持在50mmHg時,當時間積累不同時,腎小球、腎小囊以及近曲小管和
5、腎間質(zhì)都沒有發(fā)生明顯的改變。當腎內(nèi)正壓灌注壓力超過100mmHg、而低于200 mmHg時,時間積累不同時,腎小球、腎小囊沒有明顯的病理改變,但是近曲小管、腎間質(zhì)的病理損傷已經(jīng)開始凸顯,近曲小管的上皮細胞開始發(fā)生微絨毛脫落;而細胞膜以及其他細胞器,均紛紛碎裂;腎間質(zhì)有腫脹,炎性細胞被浸潤;并且以上一系列的病理變化,均伴隨著時間的積累,而逐漸加重。當腎內(nèi)正壓灌注壓力超過30分鐘,壓力維持在150mmHg、200mmHg時,灌注側(cè)的實驗豬腎
6、臟的TNF-α和TGF-β1的表達水平,均是顯著增加;而對側(cè)腎臟的TNF-α和TGF-β1的表達水平均沒有顯著變化(P<0.05)。
當腎內(nèi)負壓吸引力維持在-5mmHg時,當時間積累不同時,腎小球、腎小囊以及近曲腎小管和腎間質(zhì),都沒有發(fā)生明顯的改變。當腎內(nèi)負壓吸引力維持在-10mmHg、而低于-15 mmHg時,當時間積累不同時,腎小球、腎小囊都沒有發(fā)生明顯的改變,但近曲小管上皮細胞以及間質(zhì)細胞外基質(zhì)開始逐漸積聚,近曲腎小管上
7、皮細胞紛紛出現(xiàn)微絨毛脫落,細胞膜、細胞器開始紛紛碎裂,而腎間質(zhì)腫脹,炎性細胞浸潤等一系列變化;當腎內(nèi)負壓吸引力維持在-20mmHg時,近曲小管、腎間質(zhì)細胞外的基質(zhì)積聚,近曲腎小管上皮細胞開始出現(xiàn)微絨毛脫落,細胞膜、細胞器均紛紛開始碎裂,腎間質(zhì)明顯腫脹;炎性細胞被浸潤。且以上病理變化隨著時間的積累,而逐漸加重。當腎內(nèi)負壓吸引力維持超過30分鐘,腎內(nèi)負壓吸引力持續(xù)低于-15mmHg,負壓吸引側(cè)的實驗豬腎臟的TNF-α和TGF-β1的表達水平
8、,是顯著低于對側(cè)腎臟的(P<0.05)。
結(jié)論:
當腎內(nèi)正壓灌注壓力持續(xù)超過100mmHg時,在時間的不斷積累的情況下,近曲小管、腎皮質(zhì)和腎間質(zhì)均出現(xiàn)損傷;在腔鏡手術(shù)時,應保持低壓操作以及管道通暢,避免腎內(nèi)正壓灌注壓力持續(xù)超過100mmHg,降低對腎組織的損傷。
當腎內(nèi)負壓吸引力持續(xù)低于-15mmHg時,在時間的不斷積累的情況下,近曲小管、腎實質(zhì)、腎間質(zhì)均出現(xiàn)損傷。當需要進行負壓吸引操作(吸小石、碎石,吸膿
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