局部晚期非小細(xì)胞肺癌患者血清miR-23a表達(dá)與放化療敏感性相關(guān)研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　肺癌是目前世界范圍內(nèi)病死率最高的腫瘤之一，病理類(lèi)型以非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）為主，僅有14％-20%的患者能夠進(jìn)行手術(shù)切除，多數(shù)患者因?yàn)榱馨徒Y(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤鄰近胸膜或大血管失去手術(shù)機(jī)會(huì)。而對(duì)于不能進(jìn)行手術(shù)的局部晚期NSCLC患者，同步放化療是其標(biāo)準(zhǔn)治療方案。腫瘤細(xì)胞對(duì)放化療敏感性的差異影響患者的治療效果。隨著同步放化療在臨床上的廣泛應(yīng)用，放化療敏感性的研究

2、成為腫瘤個(gè)體化治療的關(guān)鍵一環(huán)，具有重要意義。
　　MicroRNA是一類(lèi)非編碼的單鏈小分子RNA，參與影響腫瘤放化療敏感性的多個(gè)環(huán)節(jié)。本研究團(tuán)隊(duì)的前期工作采用miRNA芯片技術(shù)篩選和NSCLC患者腫瘤乏氧相關(guān)的miRNAs，研究結(jié)果顯示miR-23a在腫瘤乏氧組織中顯著高表達(dá)。這可能與LA-NSCLC患者放化療抵抗相關(guān)，因此本課題主要探索miR-23與NSCLC患者放化療敏感性的關(guān)系。研究方法：
　　1、收集76例初治局部晚

3、期非小細(xì)胞肺癌患者治療前血清標(biāo)本，提取血清RNA。同時(shí)根據(jù)患者放療前后CT及RESIST標(biāo)準(zhǔn)分為放化療敏感組和抵抗組，實(shí)時(shí)定量熒光PCR監(jiān)測(cè)兩組標(biāo)本中microRNA-23a的表達(dá)量的差異。
　　2、通過(guò)RT-PCR檢測(cè)普通肺腺癌A549細(xì)胞株及放療抵抗A549細(xì)胞株miR-23a的表達(dá)差異。
　　3、轉(zhuǎn)染miR-23a-inhibitor到放療抵抗A549細(xì)胞株沉默miR-23a表達(dá)；普通A549細(xì)胞株轉(zhuǎn)入miR-23a-

4、mimics模擬過(guò)表達(dá)。RT-PCR及流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率。
　　4、檢測(cè)細(xì)胞增殖（MTT法），并采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)放療后R-A549細(xì)胞凋亡率等實(shí)驗(yàn)，比較不同miR-23a表達(dá)狀態(tài)對(duì)放療抵抗A549細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。
　　結(jié)果：
　　1、本研究納入76例經(jīng)病理診斷的局部晚期非小細(xì)胞肺癌患者，其中男性45例，女性31例，中位年齡為58歲，其中鱗癌患者42例，非鱗癌患者34例；腫瘤IIIA期患者30例，IIIB患者

5、46例；另外收集35例健康人的血清，其中21例男性，女性14例，健康人對(duì)照組平均年齡為53歲。入組的實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組患者的年齡、性別、KPS評(píng)分等的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2、入組患者排除放化療禁忌后行個(gè)體化同步放化療，治療后6個(gè)月內(nèi)根據(jù)RECIST標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)療效，其中6例獲CR，49例PR，18例SD，以及3例PD。定義放射敏感組為CR和PR，放療抵抗組為SD和PD。PCR檢測(cè)miR-23a的相對(duì)定量結(jié)果采用2－△△Ct法計(jì)算。研究

6、證明：1）NSCLC患者（實(shí)驗(yàn)組）的血清miR-23a相對(duì)表達(dá)量是健康對(duì)照組的4.19倍。表明miR-23a可作為NSCLC診斷的血清學(xué)標(biāo)記物；2）放療抵抗組的miR-23a表達(dá)量是放療敏感組的2.97倍。表明miR-23a有可能成為預(yù)測(cè)非小細(xì)胞肺癌患者放化療敏感性的指標(biāo)。
　　3、采用2－△△Ct法計(jì)算放療抵抗A549（R-A549）和普通A549細(xì)胞株miR-23a表達(dá)差異，結(jié)果顯示：放療抵抗A549細(xì)胞的miR-23a表達(dá)是

7、普通A549細(xì)胞的3.43倍。
　　4、凋亡實(shí)驗(yàn)顯示：miR-23a-inhibitor轉(zhuǎn)染R-A549細(xì)胞，顯示沉默miR-23a表達(dá)可增加R-A549細(xì)胞凋亡，改善R-A549細(xì)胞的放療抵抗。MTT增殖實(shí)驗(yàn)顯示：miR-23a mimic轉(zhuǎn)染普通A549細(xì)胞，相比NC組A549細(xì)胞增殖增加，對(duì)放射線(xiàn)敏感性明顯降低；而miR-23a-inhibitor轉(zhuǎn)染R-A549細(xì)胞，相比NC組R-A549細(xì)胞增殖明顯減少，細(xì)胞對(duì)放射線(xiàn)敏感