局部晚期非小細胞肺癌患者血清miR-23a表達與放化療敏感性相關研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　肺癌是目前世界范圍內(nèi)病死率最高的腫瘤之一，病理類型以非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）為主，僅有14％-20%的患者能夠進行手術切除，多數(shù)患者因為淋巴結轉移、腫瘤鄰近胸膜或大血管失去手術機會。而對于不能進行手術的局部晚期NSCLC患者，同步放化療是其標準治療方案。腫瘤細胞對放化療敏感性的差異影響患者的治療效果。隨著同步放化療在臨床上的廣泛應用，放化療敏感性的研究

2、成為腫瘤個體化治療的關鍵一環(huán)，具有重要意義。
　　MicroRNA是一類非編碼的單鏈小分子RNA，參與影響腫瘤放化療敏感性的多個環(huán)節(jié)。本研究團隊的前期工作采用miRNA芯片技術篩選和NSCLC患者腫瘤乏氧相關的miRNAs，研究結果顯示miR-23a在腫瘤乏氧組織中顯著高表達。這可能與LA-NSCLC患者放化療抵抗相關，因此本課題主要探索miR-23與NSCLC患者放化療敏感性的關系。研究方法：
　　1、收集76例初治局部晚

3、期非小細胞肺癌患者治療前血清標本，提取血清RNA。同時根據(jù)患者放療前后CT及RESIST標準分為放化療敏感組和抵抗組，實時定量熒光PCR監(jiān)測兩組標本中microRNA-23a的表達量的差異。
　　2、通過RT-PCR檢測普通肺腺癌A549細胞株及放療抵抗A549細胞株miR-23a的表達差異。
　　3、轉染miR-23a-inhibitor到放療抵抗A549細胞株沉默miR-23a表達；普通A549細胞株轉入miR-23a-

4、mimics模擬過表達。RT-PCR及流式細胞儀檢測轉染效率。
　　4、檢測細胞增殖（MTT法），并采用流式細胞儀檢測放療后R-A549細胞凋亡率等實驗，比較不同miR-23a表達狀態(tài)對放療抵抗A549細胞生物學行為的影響。
　　結果：
　　1、本研究納入76例經(jīng)病理診斷的局部晚期非小細胞肺癌患者，其中男性45例，女性31例，中位年齡為58歲，其中鱗癌患者42例，非鱗癌患者34例；腫瘤IIIA期患者30例，IIIB患者

5、46例；另外收集35例健康人的血清，其中21例男性，女性14例，健康人對照組平均年齡為53歲。入組的實驗組與對照組患者的年齡、性別、KPS評分等的差異無統(tǒng)計學意義。
　　2、入組患者排除放化療禁忌后行個體化同步放化療，治療后6個月內(nèi)根據(jù)RECIST標準評價療效，其中6例獲CR，49例PR，18例SD，以及3例PD。定義放射敏感組為CR和PR，放療抵抗組為SD和PD。PCR檢測miR-23a的相對定量結果采用2－△△Ct法計算。研究

6、證明：1）NSCLC患者（實驗組）的血清miR-23a相對表達量是健康對照組的4.19倍。表明miR-23a可作為NSCLC診斷的血清學標記物；2）放療抵抗組的miR-23a表達量是放療敏感組的2.97倍。表明miR-23a有可能成為預測非小細胞肺癌患者放化療敏感性的指標。
　　3、采用2－△△Ct法計算放療抵抗A549（R-A549）和普通A549細胞株miR-23a表達差異，結果顯示：放療抵抗A549細胞的miR-23a表達是

7、普通A549細胞的3.43倍。
　　4、凋亡實驗顯示：miR-23a-inhibitor轉染R-A549細胞，顯示沉默miR-23a表達可增加R-A549細胞凋亡，改善R-A549細胞的放療抵抗。MTT增殖實驗顯示：miR-23a mimic轉染普通A549細胞，相比NC組A549細胞增殖增加，對放射線敏感性明顯降低；而miR-23a-inhibitor轉染R-A549細胞，相比NC組R-A549細胞增殖明顯減少，細胞對放射線敏感