miR-130a直接調(diào)控雄激素受體在小鼠生精過程中的分子機制的研究.pdf

1、精子發(fā)生(spermatogenesis）是一個重要的生物學(xué)過程，它由有絲分裂（mitosis），減數(shù)分裂（meiosis）和精子變形（spermiogenesis）三個部分構(gòu)成。Ap型精原細胞經(jīng)過有絲分裂完成分化增殖，B型精原細胞分化進行減數(shù)分裂產(chǎn)生各級精母細胞以及圓形精子細胞，圓形精子細胞經(jīng)過各種形態(tài)變化過程，最后形成成熟精子。其中雄激素受體（Ar）在精子發(fā)生中起著重要作用。Ar基因突變可導(dǎo)致生精障礙和雄性不育。Ar主要表達在睪丸支

2、持細胞，雄激素通過與Ar作用調(diào)控精子發(fā)生過程。MicroRNA（miRNA）是短序列內(nèi)源性非編碼單鏈RNA。它通過與靶基因信使RNA（mRNA）的3’非翻譯區(qū)（3’UTR）區(qū)結(jié)合引起靶基因mRNA降解。從而調(diào)節(jié)靶基因的表達。越來越多的研究表明miRNA在精子發(fā)生過程中起著重要作用。但沒有研究涉及到miRNA調(diào)控Ar影響其生精功能。故我們希望通過找到能調(diào)控Ar的miRNA并探究其在小鼠精子發(fā)生中的分子機制。
　　首先，我們通過生物信

3、息學(xué)的方法尋找有可能調(diào)控Ar的miRNA。最后篩選mmu-miR-130a-3p（miR-130a）可能調(diào)控Ar。其次我們發(fā)現(xiàn)在TM4細胞系中轉(zhuǎn)染miR-130a可顯著抑制Ar的表達。雙熒光素酶結(jié)果顯示miR-130a與Ar轉(zhuǎn)錄本的73-78位結(jié)合并抑制其表達。且我們在小鼠睪丸體內(nèi)過表達miR-130a后能同樣抑制Ar的表達并且能降低Ar下游靶基因細胞連接蛋白Gja1和Zo-1的表達。以上結(jié)果揭示Ar是miR-130a的靶基因并可間接調(diào)

4、控其下游靶基因的表達。而形態(tài)學(xué)方面，與正常及對照組相比，過表達miR-130a小鼠睪丸表現(xiàn)生精小管空泡化。檢測細胞凋亡的TUNEL實驗結(jié)果顯示，與對照組相比，過表達miR-130a小鼠睪丸的TUNEL陽性細胞數(shù)顯著增多，并且細胞凋亡通路標志蛋白CASPASE-3的活化體蛋白顯著增加。上述結(jié)果揭示了miR-130a可使曲細精管中的細胞發(fā)生凋亡引起其空泡化。
　　綜上所述，在小鼠中Ar是miR-130a的靶基因并可間接調(diào)控其下游靶基因