雄激素受體-miR-124環(huán)式互調(diào)控抑制前列腺癌的增殖.pdf

1、目的:前列腺癌是男性泌尿生殖系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤之一。在前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中雄激素受體(androgen receptor，AR)信號(hào)通路發(fā)揮重要的作用。AR通過介導(dǎo)下游多種編碼及非編碼基因（例如microRNA）的表達(dá)，調(diào)控前列腺癌的增殖。已有研究表明，microRNA-124(miR-124)在前列腺癌中發(fā)揮抑癌基因的功能，但是其上游調(diào)控基因及相關(guān)分子機(jī)制尚不明確。本論文以AR及miR-124為研究對(duì)象，基于已有的研究成果通

2、過解析兩者之間的調(diào)控模式，探索AR及miR-124參與調(diào)控前列腺癌增殖的可能機(jī)制。
　　方法:在AR陰性的前列腺癌細(xì)胞系PC3中構(gòu)建AR過表達(dá)亞克隆細(xì)胞系PC3/AR和對(duì)照PC3/neo;在AR陽性的前列腺癌細(xì)胞系LNCaP中使用包含AR靶向shRNA（或?qū)φ眨┑穆《靖腥精@得AR持續(xù)敲降細(xì)胞系LNCaP-sh-AR和對(duì)照LNCaP-sh-control;在該細(xì)胞系中使用包含成熟miR-124（或?qū)φ眨┑穆《靖腥精@得穩(wěn)定過表達(dá)m

3、iR-124細(xì)胞系LNCaP-miR-124和對(duì)照LNCaP-control。采用實(shí)時(shí)定量反轉(zhuǎn)錄PCR方法檢測(cè)AR表達(dá)量改變對(duì)miR-124表達(dá)產(chǎn)生的影響及miR-124表達(dá)變化對(duì)AR表達(dá)產(chǎn)生的影響。通過雄激素應(yīng)答實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)雄激素能否引起miR-124的表達(dá)應(yīng)答。通過細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞侵潤實(shí)驗(yàn)、裸鼠皮下植瘤實(shí)驗(yàn)，在體外及體內(nèi)驗(yàn)證過表達(dá)miR-124對(duì)前列腺癌細(xì)胞增殖的抑制作用。通過重亞硫酸鹽測(cè)序法檢測(cè)pri-miR-124-3啟動(dòng)子區(qū)域

4、的甲基化程度。使用PrismGraphPad5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和作圖。采用學(xué)生式t檢驗(yàn)比較不同組間差異，當(dāng)p＜0.05時(shí)認(rèn)為兩者具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的顯著差異。
　　結(jié)果:本研究中，我們發(fā)現(xiàn)AR與miR-124之間存在環(huán)式互調(diào)控，即AR激活后可以促進(jìn)miR-124的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，同時(shí)miR-124則在轉(zhuǎn)錄后水平上抑制AR的表達(dá)，在正常生理狀態(tài)下實(shí)現(xiàn)穩(wěn)態(tài)。在前列腺癌細(xì)胞中，由于pri-miR-124-3啟動(dòng)子區(qū)域高度甲基化阻礙了AR與啟動(dòng)子