FOXA1介導(dǎo)EAF2調(diào)控雄激素受體活性以及前列腺癌細(xì)胞增殖、遷移的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的:ELL-相關(guān)因子2(EAF2)是前列腺癌中重要的腫瘤抑制因子，然而其抑癌作用的具體機(jī)制尚不清楚。蛋白間的相互作用是調(diào)控其功能的重要方式之一。本研究擬通過篩選并鑒定前列腺癌中與EAF2相互作用的蛋白，探討EAF2調(diào)控雄激素受體活性及前列腺癌細(xì)胞增殖、遷移的分子機(jī)制。
　　方法:應(yīng)用線蟲（C.elegans）模型進(jìn)行RNAi篩查，尋找與eaf-1發(fā)揮協(xié)同作用的基因。應(yīng)用免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證EAF2與篩選蛋白的結(jié)合情況。通過real

2、timePCR和劑量依賴共表達(dá)實(shí)驗(yàn)研究EAF2對所選蛋白表達(dá)的調(diào)控作用及機(jī)制。利用siRNA基因干擾技術(shù)對前列腺癌細(xì)胞中EAF2和所選蛋白進(jìn)行單獨(dú)敲除或雙敲除，realtime PCR和雙熒光素酶報告基因檢測AR下游基因的表達(dá)水平以明確AR轉(zhuǎn)錄活性變化;染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)檢測EAF2和篩選蛋白相互作用對AR與下游基因DNA結(jié)合能力的影響;BrdU、克隆形成實(shí)驗(yàn)和transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖和遷移能力的改變。
　　結(jié)

3、果:以線蟲生育能力作為參考指標(biāo)，我們篩選出5個與eaf-1（人類EAF2基因的C.elegans同源基因）具有協(xié)同作用的基因，分別為lin-53，pha-4，hmg-1.2，ruvb-1和set-6，其中pha-4的人類同源基因FOXA1在前列腺癌進(jìn)展中具有重要作用，因此我們選擇其作為后續(xù)研究基因。在前列腺癌細(xì)胞中，EAF2與FOXA1相互結(jié)合。敲除前列腺癌細(xì)胞LNCaP中的EAF2能夠上調(diào)內(nèi)源性FOXA1的蛋白水平，過表達(dá)EAF2則能

4、降低FOXA1的表達(dá)。EAF2對FOXA1的mRNA表達(dá)無影響。敲除LNCaP細(xì)胞的EAF2表達(dá)能夠上調(diào)AR下游基因表達(dá)水平，促進(jìn)AR與ARE結(jié)合，并增強(qiáng)細(xì)胞的增殖和遷移能力;對FOXA1和EAF2進(jìn)行雙敲除則能夠抵消單獨(dú)敲除EAF2對AR下游基因表達(dá)、AR同ARE的結(jié)合、LNCaP細(xì)胞增殖和遷移能力的促進(jìn)作用。表明FOXA1在EAF2對AR轉(zhuǎn)錄活性、細(xì)胞增殖和遷移的調(diào)控中起介導(dǎo)作用。
　　結(jié)論:在EAF2調(diào)控前列腺癌細(xì)胞AR信號