Hedgehog信號通路與雄激素受體的相互對話在雄激素非依賴性前列腺癌轉(zhuǎn)化中的作用.pdf

1、第一部分： Hedgehog信號通路通過調(diào)節(jié)雄激素受體促進前列腺癌非依賴性轉(zhuǎn)化 前列腺癌(prostate calacer，PCa)是男性泌尿生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一。早期前列腺癌可通過根治性手術(shù)和放療達到治愈性的效果，但晚期前列腺癌(PCa)的治療至今未取得重大進展，對已有轉(zhuǎn)移的PCa患者，以雄激素為中心的去雄激素治療(ADT)療效只能平均維持18個月或稍長的時間，不能治愈，之后幾乎所有的患者將轉(zhuǎn)變?yōu)锳IPC。目前

2、，盡管AIPC的發(fā)生機制尚不完全清楚，但學(xué)者們普遍認為雄激素受體(Androgen Receptor，AR)發(fā)揮著極其重要的作用。 Hedgehog信號通路由Hedgehog(Hh)、2個跨膜受體Patched(PTCH)、Smothened(SMO)和下游轉(zhuǎn)錄因子Gli家族等構(gòu)成。Hedgehog信號通路在胚胎發(fā)育期對胚胎生長和形體控制起著十分重要的作用，與細胞生長、分化及腫瘤的成長均密切相關(guān)。持續(xù)的Hh通路刺激可誘發(fā)前列腺

3、癌。但是，Hh通路是否在前列腺癌雄激素非依賴性轉(zhuǎn)化中發(fā)揮作用尚不明確。 本研究擬證實Hedgehog信號通路在雄激素非依賴性轉(zhuǎn)化過程中過度激活，并且通過調(diào)節(jié)AR促進前列腺癌細胞的增殖。 實驗方法： 1、應(yīng)用RT-PCR和Real-time quantitative PCR比較雄激素依賴性前列腺癌細胞系和雄激素非依賴性前列腺癌細胞系Glil的表達； 2、應(yīng)用MTT試驗檢測外源性過度激活Glil是否能促進LN

4、CAP和22RV1細胞雄激素非依賴性增殖； 3、應(yīng)用RT-PCR、Real-time quantitative PCR和WESTERN BLOT檢測外源性過度激活Glil對AR表達的影響； 4、應(yīng)用Real-time quantitative PCR檢測外源性過度激活Glil對AR調(diào)控基因的影響 5、應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法檢測外源性過度激活Glil對AR轉(zhuǎn)錄活性的影響； 6、應(yīng)用PSA報告基因檢測Glil對AR轉(zhuǎn)

5、錄活性的影響； 7、細胞免疫熒光檢測Glil對AR細胞定位的影響； 8、小RNA干擾Glil對前列腺癌細胞抗雄治療效果的影響； 結(jié)果： 1、雄激素非依賴性前列腺癌細胞Glil的表達高于雄激素依賴性前列腺癌細胞； 2、Glil促進LNCAP和22RV1細胞雄激素非依賴性增殖； 3、Glil促進AR mRNA和蛋白的表達； 4、Glil促進AR調(diào)控基因PSA的表達； 5、Gli

6、l促進前列腺癌細胞AR轉(zhuǎn)錄活性； 6、Glil促進AR由胞漿向胞核轉(zhuǎn)位； 7、小RNA干擾Glil可增強Bicalutamide治療前列腺癌的效果。 結(jié)論： 本研究證實前列腺癌非依賴性轉(zhuǎn)化過程中Hedgehog信號通路過度激活，轉(zhuǎn)錄因子Glil表達增加，通過對AR調(diào)控來促進前列腺癌非依賴性增殖，調(diào)控途徑包括：促進表達，增加轉(zhuǎn)錄活性，促進核轉(zhuǎn)位。更重要的是，小RNA干擾Glil可增強Bicalutamide

7、治療前列腺癌的效果。 第二部分：雄激素受體調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子Glil的表達和活性 Hedgehog是一類在胚胎發(fā)育過程中起關(guān)鍵作用的信號調(diào)節(jié)因子。研究認為Hh信號在前列腺導(dǎo)管形成分化以及基質(zhì)-上皮的相互作用等機制中發(fā)揮著重要作用，從而調(diào)節(jié)前列腺發(fā)育、生長和細胞增殖。有研究證實在前列腺發(fā)育過程中，出現(xiàn)了Hh表達高峰，與此同時血清睪酮也急劇上升，提示睪酮和Hh可能存在協(xié)同作用。此外，體外和動物體內(nèi)實驗均表明，因Hh功能喪失造成前

8、列腺發(fā)育的缺陷可通過增加睪酮濃度的方法來補救。因此，我們推測AR信號通路可能對Hedgehog的表達或/和活性存在影響。 本研究擬證實AR通路對Hedgehog信號通路的轉(zhuǎn)錄因子Glil表達對的影響，并結(jié)合報告基因研究其對Glil活性的調(diào)節(jié)作用。 實驗方法： 1、應(yīng)用RT-PCR檢測不同濃度DHT和Bicalutamide處理前列腺癌細胞后Glil的表達；Hedgehog信號通路與雄激素受體的相互對話在雄激素非依

9、賴性前列腺癌轉(zhuǎn)化中的作用 2、應(yīng)用RT-PCR檢測檢測外源性過度激活A(yù)R是否能促進前列腺癌細胞Glil的表達： 3、應(yīng)用WESTERN BLOT檢測外源性過度激活A(yù)R對Glil表達的影響； 4、應(yīng)用Glil報告基因檢測AR對Glil轉(zhuǎn)錄活性的影響 5、細胞免疫熒光檢測Glil對AR細胞定位的影響 結(jié)果： 1、不同濃度的DHT和Bicalutamide對前列腺癌細胞的Glil mRNA表達無