雄激素及其受體調控Srsf4表達的分子機理.pdf

1、大量的臨床與實驗研究資料表明，雄激素及其受體（Androgen receptor, AR）在精子發(fā)生過程中具有非常重要的作用。雄激素水平低下或AR基因突變可導致精子發(fā)生障礙和男性不育癥；睪丸組織內不同細胞類型的條件性 Ar基因敲除小鼠研究表明，雄激素主要通過與睪丸支持細胞的AR作用，調控精子發(fā)生過程。因此，近年來人們一直在睪丸支持細胞尋找受雄激素及其受體調節(jié)的靶基因。本實驗室采用數(shù)字化表達譜測序技術（Digital gene expre

2、ssion sequencing, DGE-seq）篩選到受雄激素及其受體下調的候選靶基因之一Srsf4（serine/arginine-rich splicing actor4）。最新的研究發(fā)現(xiàn)SRSF4與非梗阻性無精子癥存在相關性，因此，我們推測Srsf4可能是支持細胞中受雄激素及其受體調控的靶基因。
　　目的:通過全身 Ar基因敲除小鼠模型和小鼠睪丸支持細胞來源的細胞系研究SRSF4受雄激素及其受體調控的分子機理及其與精子發(fā)

3、生的關系，為進一步探索治療男性不育癥的方法提供新的思路。
　　方法:我們采用qRT-PCR和免疫熒光技術檢測小鼠睪丸組織中Srsf4的表達量及SRSF4的表達定位。我們采用qRT-PCR、western blot和免疫熒光染色等技術比較全身AR基因敲除和野生型小鼠睪丸中SRSF4的表達差異、睪丸支持細胞系TM4細胞過表達及敲減AR后SRSF4的表達差異。同時，我們構建雄激素下調的動物模型，采用qRT-PCR檢測Srsf4的mRNA

4、水平。最后，我們采用雙熒光素酶報告載體實驗、凝膠遷移實驗和染色質免疫共沉淀等方法研究雄激素及其受體調控 SRSF4的分子機理。
　　結果:SRSF4在睪丸組織中高表達，主要定位于睪丸支持細胞。與野生型雄鼠相比，全身Ar基因敲除小鼠睪丸組織中SRSF4表達顯著升高。在TM4細胞中過表達AR后SRSF4表達下降，而敲減AR后SRSF4表達上升，并且，我們在出生后7天雄鼠身上注射氟他胺干擾內源性睪酮水平發(fā)現(xiàn) Srsf4表達上升，繼續(xù)注射

5、睪酮后Srsf4表達回降，這些結果均提示SRSF4受雄激素及其受體下調。雙熒光素酶報告載體實驗，凝膠遷移實驗和染色質免疫共沉淀等研究結果表明，雄激素及其受體特異性與Srsf4基因啟動子區(qū)域的雄激素反應原件(androgen-responsive element, ARE)位點結合，下調其表達。
　　結論:在小鼠睪丸支持細胞中，雄激素及其受體直接特異性結合與 Srsf4基因啟動子區(qū)域的ARE位點結合，從而下調其表達，表明Srsf4是