Exendin-4減輕脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的機(jī)制研究.pdf

1、目的:心肌梗死是危害人類健康的頭號(hào)殺手。由于冠狀動(dòng)脈的持續(xù)阻塞，導(dǎo)致心肌出現(xiàn)缺血性壞死，隨后形成疤痕修復(fù)，并緩慢進(jìn)展為心功能不全。常用的治療手段如介入治療、外科動(dòng)脈搭橋術(shù)等可以通過開通受阻血管、恢復(fù)血流，從而顯著降低心肌缺血的程度和范圍。但是這些方法都無法從根本上挽救已經(jīng)壞死的心肌。近20年來，干細(xì)胞移植技術(shù)通過再生心肌及旁分泌功能，修復(fù)心梗后壞死損傷的組織細(xì)胞，成為改善患者心功能和臨床預(yù)后的治療方法之一。在各種種子細(xì)胞中，脂肪來源間充

2、質(zhì)干細(xì)胞(ADMSCs)已被很多臨床和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)可以優(yōu)化心梗后的治療，國(guó)外正在進(jìn)行兩個(gè)有關(guān)ADMSCs治療的臨床Ⅰ期試驗(yàn)。然而，人們發(fā)現(xiàn)限制ADMSCs在臨床上進(jìn)一步應(yīng)用的主要難題在于心梗后移植的細(xì)胞在一周內(nèi)大量死亡，從而導(dǎo)致了移植效率低下。其主要機(jī)制是由于移植后的細(xì)胞不耐受心梗后的氧化應(yīng)激微環(huán)境，進(jìn)而出現(xiàn)細(xì)胞凋亡壞死。因此，探討氧化應(yīng)激致細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵信號(hào)通路并以此為靶點(diǎn)來提高細(xì)胞抗氧化應(yīng)激損傷的能力是目前的研究熱點(diǎn)。Exendin

3、-4是GLP-1類似物，擁有減輕炎癥反應(yīng)、抗氧化應(yīng)激等多種細(xì)胞保護(hù)效應(yīng)，本研究旨在闡明氧化應(yīng)激介導(dǎo)ADMSCs凋亡的關(guān)鍵信號(hào)通路;通過Exendin-4干預(yù)來降低ADMSCs氧化應(yīng)激損傷，提高ADMSCs的存活能力。
　　方法:從大鼠腹股溝處的脂肪組織提取ADMSCs，流式細(xì)胞學(xué)及多向分化潛能檢測(cè)鑒定ADMSCs;觀察不同濃度Exendin-4對(duì)ADMSCs體外增殖能力的影響及細(xì)胞表面GLP-1R受體表達(dá)的影響;建立過氧化氫誘導(dǎo)氧

4、化應(yīng)激凋亡模型，明確caspase9介導(dǎo)的線粒體凋亡通路在細(xì)胞凋亡中的作用;使用Exendin-4干預(yù)過氧化氫誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷凋亡過程，利用通路阻斷劑和干擾RNA技術(shù)，闡明 PI3K/Akt-Sfrp2在Exendin-4抗凋亡過程中的機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1.分離培養(yǎng)的ADMSCs表面抗原為CD31-、CD34-、CD45-、CD29+、CD90+。
　　2.ADMSCs能夠在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中向骨及脂肪細(xì)胞分化。

5、r>　　3.Exendin-4能夠以劑量依賴方式提高體外培養(yǎng)時(shí)ADMSCs的數(shù)目。
　　4.過氧化氫處理提高ADMSCs凋亡細(xì)胞的數(shù)量，胞內(nèi)ROS、MDA的水平提高而GSH和SOD的含量下降，同時(shí)線粒體膜電位表現(xiàn)為低電勢(shì)，細(xì)胞色素C滲漏至胞質(zhì)胞核中;凋亡蛋白(Bax、caspase9和caspase3)表達(dá)上調(diào)，保護(hù)性蛋白(Bcl-2、c-IAP1和c-IAP2)表達(dá)下降。
　　5.Exendin-4預(yù)處理后降低過氧化氫條件

6、下凋亡細(xì)胞數(shù)目，同時(shí)上調(diào)GSH和SOD而抑制胞內(nèi)ROS和MDA含量;維持線粒體正常高電位，抑制細(xì)胞色素C的滲漏;下調(diào)凋亡蛋白并提高保護(hù)性蛋白的表達(dá)。
　　6.Exendin-4可以借由PI3K/Akt信號(hào)途徑激活Sfrp2，使用LY294002阻斷PI3K/Akt通路或是使用siRNA敲低Sfrp2的表達(dá)可以抑制Exendin-4對(duì)ADMSCs線粒體膜電位、凋亡相關(guān)蛋白的調(diào)控作用，逆轉(zhuǎn)Exendin-4的抗凋亡作用。
　　結(jié)