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1、目的:探討非接觸共培養(yǎng)條件下人BMSCs對(duì)氧化應(yīng)激誘導(dǎo)退變髓核細(xì)胞(Nucleus pulposus,NPCs)凋亡的保護(hù)作用。
方法:分離、培養(yǎng)人BMSCs和退變椎間盤(pán)NPCs,鑒定細(xì)胞表型。取第3代BMSCs和第1代NPCs分為:A組單純NPCs培養(yǎng);B組BMSCs與NPCs細(xì)胞比例1:1共培養(yǎng);C組BMSCs與NPCs細(xì)胞比例1:3共培養(yǎng);D組單純NPCs培養(yǎng),行凋亡誘導(dǎo)。B、C、D組分別于第3、7天加入H2O2誘導(dǎo)
2、NPCs凋亡。各時(shí)間點(diǎn)收集四組NPCs,DAPI染色觀察細(xì)胞核形態(tài),流式細(xì)胞儀量化細(xì)胞凋亡率,半定量RT-PCR檢測(cè)Bcl-2、Bax基因轉(zhuǎn)錄水平,Western-blot檢測(cè)Caspase-3蛋白含量。
結(jié)果:第3代BMSCs呈CD34-、CD45-、CD13+;NPCs于胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)Ⅱ型膠原和聚集蛋白聚糖。凋亡NPCs的細(xì)胞核固縮;共培養(yǎng)后B、C組NPCs凋亡率均低于D組,高于A組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05):共培
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