杜仲雄花粉蛋白成分的分離純化研究.pdf

1、杜仲科植物杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)的花粉是由其雄花產(chǎn)生的，故稱杜仲雄花花粉。早年對于杜仲的研究主要是局限于杜仲皮和杜仲葉，且以小分子化合物為主。上世紀70年代起，在國內(nèi)外掀起了對花粉的研究熱潮，許多學者做了大量的研究工作。但是，有關杜仲花粉的研究和開發(fā)，國內(nèi)外還鮮見報道。
　　本實驗主要是從杜仲雄花花粉中分離純化出多種生物活性蛋白，為杜仲花粉在保健或醫(yī)療行業(yè)的開發(fā)利用奠定基礎。本實驗以杜仲花粉為研究材

2、料，通過破壁實驗，超聲提取功率、時間、次數(shù)、料液比、和緩沖液 pH等單因素條件進行優(yōu)化，通過鹽析、透析、葡聚糖凝膠柱色譜法和高效液相色譜法等方法從杜仲雄花花粉中提取出具有生物活性的蛋白組分，并通過蛋白質含量測定以及紫外線全波長掃描等方面的分析，主要結果如下：
　　1、以杜仲花粉破壁率和相應的清蛋白得率為指標，對溫差法、液氮混合手工研磨、液氮混合球磨儀研磨這三種花粉破壁方法進行比較，得出了液氮混合球磨儀研磨法為實驗室條件下簡單高效的

3、破壁方法。
　　2、堿溶谷蛋白是杜仲雄花花粉中的蛋白質主要成分，占杜仲花粉分級蛋白提取總量的80％以上。
　　3、通過對杜仲雄花粉分級蛋白提取率的測定比較，得出了超聲波細胞破碎儀輔助提取的分級蛋白總提取率達到72.22%，分別是浸提法的1.9倍，超聲波清洗儀輔助提取的3.2倍。
　　4、通過單因素實驗分析確定了杜仲花粉蛋白的最佳超聲提取條件為：溶液提取pH10，料液比1:25，超聲功率300W，超聲時間10min，超聲

4、次數(shù)4次。
　　5、硫酸銨分級沉淀過程中，通過各個飽和度的實驗，確定了10%，30%，45%、60%、75%、90%六個沉淀組分，其中30%蛋白組分是占總沉淀的主要組分，占90%以上，所以試驗中以30%這部分作為實驗的主要組分。
　　6、兩次Sephadex G-50色譜層析后，得到了兩個蛋白組分。高效液相色譜法鑒定這兩個組分至少有五種以上的蛋白存在。
　　7、通過對透析外液的紫外全波長掃描，顯示在200～225nm遠