DRC3f對實驗性大鼠非酒精性脂肪肝保護作用的脂肪代謝機制研究.pdf

1、目的：非酒精性脂肪肝（NAFLD）是一類除外酒精和其他明確損肝因素導致的以肝細胞內(nèi)脂肪蓄積為主要特點的臨床病理綜合征。隨著人民生活水平的提高，我國 NAFLD患病率正在逐年上升。目前研究認為， NAFLD是由多種因素平行作用導致，飲食習慣、遺傳因素和環(huán)境因素可共同影響脂肪代謝，少數(shù)患者可因肝細胞炎癥而進展為肝纖維化、肝硬化、肝細胞肝癌。本研究室前期采用飛行質(zhì)譜技術(shù)（MALDI-TOF MS）在慢性乙型肝炎患者血清中檢測到一種含有16個氨

2、基酸的差異性多肽片段：脫精氨酸補體C3f（DRC3f），該多肽在輕度和中度的病人血清中表達高于重度病人。進一步研究發(fā)現(xiàn) DRC3f具有抑制肝細胞增殖的作用，其對免疫性肝損傷、肝纖維化均有保護作用。本實驗室前期關(guān)于DRC3f對非酒精性脂肪肝保護性作用的動物實驗發(fā)現(xiàn) DRC3f可減少高脂飲食聯(lián)合四氯化碳導致的大鼠肝臟空泡樣變，改善血清學指標，但是 DRC3f發(fā)揮保護作用的具體分子機制尚不完全明確。本研究通過 AMPK通路、PPAR/LXR通

3、路和PI3K/Akt通路從脂肪代謝機制的角度來探索DRC3f對非酒精性脂肪肝的保護作用，為非酒精性脂肪肝的治療提供實驗依據(jù)。
　　方法：本研究選擇前期動物實驗中血清學指標和肝組織切片病理學指標均較好的DRC3f200μg/kg組（DRC3f組）以及正常對照組（正常組）、高脂飲食聯(lián)合四氯化碳誘導大鼠NAFLD模型組（模型組）、復方甘草酸苷陽性對照組（灌胃給予復方甘草酸苷，復方甘草酸苷組）、降脂通絡軟膠囊陽性對照組（灌胃給予降脂通絡軟

4、膠囊，降脂通絡軟膠囊組）的留存肝組織樣本作為研究對象。
　　1.應用qRT-PCR方法測定凍存大鼠肝組織中的AMPK信號通路相關(guān)指標：adiponectin、LKB1、AMPKα1、AMPKα2、ACC、CPT1、SREBP-1c、PNPLA3、FAS；PPAR和LXR脂代謝相關(guān)通路的指標：PPARα、LXRα、PPARγ；炎癥、纖維化和細胞增殖相關(guān)因子：IL-6、TGF-β1、collagen1、PCNA的基因表達水平。

5、　　2.應用western-blot方法測定正常組、模型組、DRC3f組、復方甘草酸苷組、降脂通絡軟膠囊組肝組織的p-AMPKα/AMPKα、PI3K、p-Akt/Akt蛋白相對表達水平。
　　結(jié)果：
　　1.AMPK信號通路的相關(guān)基因及蛋白表達水平
　　模型組AMPKα1、AMPKα2 mRNA相對表達量與正常組相比均降低（P<0.001），DRC3f組、復方甘草酸苷組、降脂通絡軟膠囊組與模型組比，AMPKα1、AM

6、PKα2 mRNA相對表達量均升高（P<0.01），且DRC3f組AMPKa1和AMPKα2 mRNA表達量高于復方甘草酸苷組和降脂通絡軟膠囊組（P<0.001）。與正常組比，模型組p-AMPKα/AMPKα蛋白相對表達量降低（P<0.01），DRC3f組與模型組比p-AMPKα/AMPKα蛋白相對表達量升高（P<0.05）。
　　模型組 adiponectin、LKB1 mRNA相對表達量與正常組相比均降低（P<0.05）。與模

7、型組相比，DRC3f組adiponectin、LKB1mRNA相對表達量均升高（P<0.01），且DRC3f組adiponectin、LKB1mRNA表達量均高于復方甘草酸苷組和降脂通絡軟膠囊組（P<0.05）。
　　模型組 CPT1 mRNA相對表達與正常組相比降低（P<0.05），ACC mRNA相對表達升高（P<0.001）。與模型組相比，DRC3f組、復方甘草酸苷組、降脂通絡軟膠囊組 ACC mRNA相對表達量降低（P<0

8、.001）， CPT1 mRNA相對表達量升高（P<0.01）。
　　模型組SREBP-1c、PNPLA3、FAS mRNA相對表達量與正常組相比均升高（P<0.001）。與模型組比，DRC3f組、復方甘草酸苷組、降脂通絡軟膠囊組SREBP-1c、PNPLA3、FAS mRNA相對表達量均降低（P<0.01），但是 DRC3f組 SREBP-1c mRNA表達水平高于降脂通絡軟膠囊組（P<0.001），而PNPLA3、FAS mR

9、NA與降脂通絡軟膠囊組和復方甘草酸苷組之間無顯著性差別。
　　2.PPARα、LXRα、PPARγ的基因表達水平
　　各組之間PPARα與LXRαmRNA相對表達量均無統(tǒng)計學差異。模型組與正常組比，PPARγmRNA相對表達量升高（P<0.001）；降脂通絡軟膠囊組與模型組比PPARγmRNA相對表達量降低（P<0.05），但是DRC3f組與模型組相比無統(tǒng)計學差異（P=0.118）。
　　3.胰島素相關(guān)PI3K、p-A

10、kt/Akt的蛋白表達水平
　　Western blot結(jié)果顯示，正常組、模型組、DRC3f組、復方甘草酸苷組、降脂通絡軟膠囊組PI3K和p-Akt/Akt的蛋白相對表達均無統(tǒng)計學差異。
　　4.炎癥、纖維化和細胞增殖相關(guān)因子IL-6、TGF-β1、collagen1、PCNA的表達水平
　　模型組IL-6、TGF-β1、collagen1 mRNA相對表達量與正常組相比均升高（P<0.001）。與模型組相比，DRC3

11、f組、復方甘草酸苷組、降脂通絡軟膠囊組IL-6、TGF-β1 mRNA相對表達量均降低（P<0.05）；DRC3f組、復方甘草酸苷組、降脂通絡軟膠囊組collagen1 mRNA相對表達水平降低（P<0.05），且DRC3f組collagen1 mRNA相對表達量低于復方甘草酸苷組和降脂通絡軟膠囊組（P<0.01）。各組之間PCNA mRNA相對表達量無統(tǒng)計學差異。
　　結(jié)論：
　　1.DRC3f對高脂飲食聯(lián)合四氯化碳誘導的