基于細(xì)胞外基質(zhì)降解系統(tǒng)研究加味黃芪赤風(fēng)湯對(duì)腎臟纖維化的影響.pdf

1、背景:終末期腎臟病(ESRD)已成為威脅人類健康的全球性公共衛(wèi)生問題，是慢性腎臟病的最后階段。而原發(fā)性腎小球疾病是導(dǎo)致慢性腎臟病的主要原因之一，其蛋白尿的持續(xù)存在是造成腎臟損害、病程進(jìn)展的相對(duì)獨(dú)立的危險(xiǎn)因素，是腎臟病理改變的重要原因。因此控制蛋白尿、改善腎功能，在很大程度上可以減輕腎臟纖維化，延緩慢性腎臟病的進(jìn)展。腎臟纖維化是各種腎臟疾病長(zhǎng)期作用所致的細(xì)胞外基質(zhì)的異常堆積、腎小管及腎間質(zhì)毛細(xì)血管功能的喪失，以腎小球硬化、腎間質(zhì)纖維化為主

2、要病理表現(xiàn)。腎臟系膜細(xì)胞是產(chǎn)生細(xì)胞外基質(zhì)的主要效應(yīng)細(xì)胞之一，對(duì)調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的合成與降解起著至關(guān)重要的作用。病理狀態(tài)下，如系膜增生性IgA腎病、狼瘡性腎炎、糖尿病腎病及一些免疫介導(dǎo)的腎小球疾病等在系膜細(xì)胞的損害方面的表現(xiàn)都是以系膜細(xì)胞的增殖，細(xì)胞外基質(zhì)的過(guò)量集聚為主要特征。因此減少系膜細(xì)胞過(guò)度增殖，抑制細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生過(guò)度，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的降解，對(duì)于減輕腎小球損傷、防止腎臟疾病的進(jìn)展，延緩腎臟纖維化具有重要意義。細(xì)胞外基質(zhì)的合成增多，降

3、解減少，其中細(xì)胞外基質(zhì)的降解系統(tǒng)失常是導(dǎo)致腎臟纖維化的關(guān)鍵因素。近年來(lái)研究表明，調(diào)控細(xì)胞外基質(zhì)降解系統(tǒng)的平衡，可以減輕腎組織炎癥反應(yīng)及病理程度。
　　加味黃芪赤風(fēng)湯是導(dǎo)師張昱教授多年臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)出來(lái)的治療慢性腎臟病1-2期蛋白尿的驗(yàn)方，前期實(shí)驗(yàn)研究得出，含藥血清——加味黃芪赤風(fēng)湯可以減少LPS誘導(dǎo)的小鼠系膜細(xì)胞的增殖，下調(diào)系膜細(xì)胞外基質(zhì)中FN、LN、Col-Ⅳ表達(dá);同時(shí)可以通過(guò)上調(diào)Bax、Caspase-3表達(dá)，降低Bcl-2表達(dá)

4、及Bcl-2/Bax比值，促進(jìn)系膜細(xì)胞凋亡的作用。臨床觀察部分?jǐn)M觀察加味黃芪赤風(fēng)湯治療慢性腎臟病1-2期蛋白尿的的臨床療效及安全性。實(shí)驗(yàn)研究部分?jǐn)M通過(guò)研究加味黃芪赤風(fēng)湯對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠系膜細(xì)胞外基質(zhì)降解作用以及α-SMA的影響，為加味黃芪赤風(fēng)湯的臨床運(yùn)用提供更進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。
　　一.臨床觀察
　　目的:觀察加味黃芪赤風(fēng)顆粒治療慢性腎臟病1-2期蛋白尿的臨床療效及安全性。
　　方法:采用單病例隨機(jī)對(duì)照設(shè)計(jì)，每

5、個(gè)病例的研究共分3輪，每輪2期，即治療組和對(duì)照組，每期4周，每一輪按隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分組，決定治療方案，在常規(guī)基礎(chǔ)治療的基礎(chǔ)上，治療組采用加味黃芪赤風(fēng)湯治療，對(duì)照組采用貝那普利治療，療效指標(biāo)為患者的臨床癥狀積分和24小時(shí)尿蛋白定量，安全性指標(biāo)為肝腎功能、心電圖等?；颊呙科趯?shí)驗(yàn)前和實(shí)驗(yàn)后均記錄實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。
　　結(jié)果:加味黃芪赤風(fēng)顆?？梢燥@著改善脾腎虧虛兼有血瘀患者的臨床癥狀，其改善效果明顯優(yōu)于貝那普利，明顯降低患者24小時(shí)尿蛋白定量，

6、對(duì)患者肝腎功能及心電圖無(wú)不良影響。
　　結(jié)論:加味黃芪赤風(fēng)顆?？梢燥@著改善脾腎虧虛兼有血瘀患者的臨床癥狀，顯著降低蛋白尿;且對(duì)肝腎功能及心電圖等無(wú)不良影響，在一定程度具有保護(hù)腎功能的作用。
　　實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:探討加味黃芪赤風(fēng)湯(Modified Hangqichifeng Decoction，MHD)對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠腎小球系膜細(xì)胞(GMCs)外基質(zhì)降解作用以及Ⅱ-SMA蛋白表達(dá)的影響。
　　方法:分別用高

7、、中、低不同劑量的加味黃芪赤風(fēng)湯、替米沙坦、純凈水對(duì)大鼠持續(xù)灌胃3天后，制備含藥血清及空白對(duì)照血清，采用10％的各組含藥血清DMEM培養(yǎng)液，作用于體外培養(yǎng)的GMCs，以LPS作為刺激因子。將細(xì)胞分為正常對(duì)照組（空白血清組）、模型組（LPS組）、替米沙坦組、加味黃芪赤風(fēng)湯高劑量組、中劑量組、低劑量組。1.利用ELISA法檢測(cè)系膜細(xì)胞上清液中MMP-9、TIMP-1、ColⅣ的含量;2.采用Western Blot法檢測(cè)GMCs中MMP-2

8、、TIMP-2、PAI-1、α-SMA蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:①與正常組相比，模型組細(xì)胞培養(yǎng)液中ColⅣ含量明顯增多，p＜0.01，兩組之間差異顯著;與模型組相比，加味黃芪赤風(fēng)湯高、中劑量組及替米沙坦組能明顯減少細(xì)胞外基質(zhì)中ColⅣ蛋白表達(dá)，中藥低劑量組與模型組之間無(wú)顯著差異;②模型組與正常組相比，MMP-9/TIMP-1、MMP-2/TIMP-2比例均降低，兩組有顯著差異;與模型組相比，替米沙坦組、中藥高、中、低劑量組MMP-9/

9、TIMP-1、MMP-2/TIMP-2比值均有所升高，其中替米沙坦組、中藥高、中劑量組比值上調(diào)幅度較大，與模型組相比差異顯著(p＜0.01);中藥低劑量組與模型組相比，比值雖輕度上調(diào)，但組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。替米沙坦與加味黃芪赤風(fēng)湯高、中、低劑量組藥物血清均能調(diào)節(jié)LPS誘導(dǎo)的MMP-9/TIMP-1、MMP-2/TIMP-2比例失衡，且中藥高劑量、替米沙坦組、中藥中劑量的上調(diào)作用均優(yōu)于中藥低劑量組。③與正常組相比，模型組PAI-1的表達(dá)

10、明顯升高(p＜0.01);與模型組相比，替米沙坦組PAI-1蛋白表達(dá)明顯減少，組間差異顯著(p＜0.05)，中藥高、中劑量組，PAI-1表達(dá)均顯著下調(diào)，差異非常顯著，p＜0.01;中藥低劑量組與模型組相比，PAI-1表達(dá)下調(diào)，差異顯著，p＜0.05。中藥高劑量組PAI-1蛋白表達(dá)明顯少于中藥中劑量組、替米沙坦組、低劑量組。替米沙坦組與中藥低劑量組相比，p＞0.05，兩組無(wú)顯著差異。④與正常組相比，模型組α-SMA的表達(dá)明顯升高，p＜0.

11、01;中藥高劑量組與模型組相比，p＜0.01，差異非常顯著;替米沙坦組、中藥中劑量組與模型組相比，α-SMA的表達(dá)明顯下降，p＜0.05，有顯著差異;中藥低劑量組與模型組相比，p＞0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。中藥高劑量組與中藥低劑量組相比，p＜0.05，有顯著差異。
　　結(jié)論:加味黃芪赤風(fēng)湯可以調(diào)節(jié)LPS誘導(dǎo)的ECM降解失調(diào)，上調(diào)MMP-9/TIMP-1、MMP-2/TIMP-2比值，抑制ECM中ColⅣ的過(guò)度產(chǎn)生，促進(jìn)ECM的降