基于細胞外基質(zhì)降解系統(tǒng)研究加味黃芪赤風湯對腎臟纖維化的影響.pdf

1、背景:終末期腎臟病(ESRD)已成為威脅人類健康的全球性公共衛(wèi)生問題，是慢性腎臟病的最后階段。而原發(fā)性腎小球疾病是導致慢性腎臟病的主要原因之一，其蛋白尿的持續(xù)存在是造成腎臟損害、病程進展的相對獨立的危險因素，是腎臟病理改變的重要原因。因此控制蛋白尿、改善腎功能，在很大程度上可以減輕腎臟纖維化，延緩慢性腎臟病的進展。腎臟纖維化是各種腎臟疾病長期作用所致的細胞外基質(zhì)的異常堆積、腎小管及腎間質(zhì)毛細血管功能的喪失，以腎小球硬化、腎間質(zhì)纖維化為主

2、要病理表現(xiàn)。腎臟系膜細胞是產(chǎn)生細胞外基質(zhì)的主要效應細胞之一，對調(diào)節(jié)細胞外基質(zhì)的合成與降解起著至關(guān)重要的作用。病理狀態(tài)下，如系膜增生性IgA腎病、狼瘡性腎炎、糖尿病腎病及一些免疫介導的腎小球疾病等在系膜細胞的損害方面的表現(xiàn)都是以系膜細胞的增殖，細胞外基質(zhì)的過量集聚為主要特征。因此減少系膜細胞過度增殖，抑制細胞外基質(zhì)的產(chǎn)生過度，促進細胞外基質(zhì)的降解，對于減輕腎小球損傷、防止腎臟疾病的進展，延緩腎臟纖維化具有重要意義。細胞外基質(zhì)的合成增多，降

3、解減少，其中細胞外基質(zhì)的降解系統(tǒng)失常是導致腎臟纖維化的關(guān)鍵因素。近年來研究表明，調(diào)控細胞外基質(zhì)降解系統(tǒng)的平衡，可以減輕腎組織炎癥反應及病理程度。
　　加味黃芪赤風湯是導師張昱教授多年臨床經(jīng)驗總結(jié)出來的治療慢性腎臟病1-2期蛋白尿的驗方，前期實驗研究得出，含藥血清——加味黃芪赤風湯可以減少LPS誘導的小鼠系膜細胞的增殖，下調(diào)系膜細胞外基質(zhì)中FN、LN、Col-Ⅳ表達;同時可以通過上調(diào)Bax、Caspase-3表達，降低Bcl-2表達

4、及Bcl-2/Bax比值，促進系膜細胞凋亡的作用。臨床觀察部分擬觀察加味黃芪赤風湯治療慢性腎臟病1-2期蛋白尿的的臨床療效及安全性。實驗研究部分擬通過研究加味黃芪赤風湯對LPS誘導的小鼠系膜細胞外基質(zhì)降解作用以及α-SMA的影響，為加味黃芪赤風湯的臨床運用提供更進一步的實驗和理論依據(jù)。
　　一.臨床觀察
　　目的:觀察加味黃芪赤風顆粒治療慢性腎臟病1-2期蛋白尿的臨床療效及安全性。
　　方法:采用單病例隨機對照設計，每

5、個病例的研究共分3輪，每輪2期，即治療組和對照組，每期4周，每一輪按隨機數(shù)字表隨機分組，決定治療方案，在常規(guī)基礎治療的基礎上，治療組采用加味黃芪赤風湯治療，對照組采用貝那普利治療，療效指標為患者的臨床癥狀積分和24小時尿蛋白定量，安全性指標為肝腎功能、心電圖等。患者每期實驗前和實驗后均記錄實驗室指標。
　　結(jié)果:加味黃芪赤風顆粒可以顯著改善脾腎虧虛兼有血瘀患者的臨床癥狀，其改善效果明顯優(yōu)于貝那普利，明顯降低患者24小時尿蛋白定量，

6、對患者肝腎功能及心電圖無不良影響。
　　結(jié)論:加味黃芪赤風顆?？梢燥@著改善脾腎虧虛兼有血瘀患者的臨床癥狀，顯著降低蛋白尿;且對肝腎功能及心電圖等無不良影響，在一定程度具有保護腎功能的作用。
　　實驗研究
　　目的:探討加味黃芪赤風湯(Modified Hangqichifeng Decoction，MHD)對LPS誘導的小鼠腎小球系膜細胞(GMCs)外基質(zhì)降解作用以及Ⅱ-SMA蛋白表達的影響。
　　方法:分別用高

7、、中、低不同劑量的加味黃芪赤風湯、替米沙坦、純凈水對大鼠持續(xù)灌胃3天后，制備含藥血清及空白對照血清，采用10％的各組含藥血清DMEM培養(yǎng)液，作用于體外培養(yǎng)的GMCs，以LPS作為刺激因子。將細胞分為正常對照組（空白血清組）、模型組（LPS組）、替米沙坦組、加味黃芪赤風湯高劑量組、中劑量組、低劑量組。1.利用ELISA法檢測系膜細胞上清液中MMP-9、TIMP-1、ColⅣ的含量;2.采用Western Blot法檢測GMCs中MMP-2

8、、TIMP-2、PAI-1、α-SMA蛋白表達。
　　結(jié)果:①與正常組相比，模型組細胞培養(yǎng)液中ColⅣ含量明顯增多，p＜0.01，兩組之間差異顯著;與模型組相比，加味黃芪赤風湯高、中劑量組及替米沙坦組能明顯減少細胞外基質(zhì)中ColⅣ蛋白表達，中藥低劑量組與模型組之間無顯著差異;②模型組與正常組相比，MMP-9/TIMP-1、MMP-2/TIMP-2比例均降低，兩組有顯著差異;與模型組相比，替米沙坦組、中藥高、中、低劑量組MMP-9/

9、TIMP-1、MMP-2/TIMP-2比值均有所升高，其中替米沙坦組、中藥高、中劑量組比值上調(diào)幅度較大，與模型組相比差異顯著(p＜0.01);中藥低劑量組與模型組相比，比值雖輕度上調(diào)，但組間差異無統(tǒng)計學意義。替米沙坦與加味黃芪赤風湯高、中、低劑量組藥物血清均能調(diào)節(jié)LPS誘導的MMP-9/TIMP-1、MMP-2/TIMP-2比例失衡，且中藥高劑量、替米沙坦組、中藥中劑量的上調(diào)作用均優(yōu)于中藥低劑量組。③與正常組相比，模型組PAI-1的表達

10、明顯升高(p＜0.01);與模型組相比，替米沙坦組PAI-1蛋白表達明顯減少，組間差異顯著(p＜0.05)，中藥高、中劑量組，PAI-1表達均顯著下調(diào)，差異非常顯著，p＜0.01;中藥低劑量組與模型組相比，PAI-1表達下調(diào)，差異顯著，p＜0.05。中藥高劑量組PAI-1蛋白表達明顯少于中藥中劑量組、替米沙坦組、低劑量組。替米沙坦組與中藥低劑量組相比，p＞0.05，兩組無顯著差異。④與正常組相比，模型組α-SMA的表達明顯升高，p＜0.

11、01;中藥高劑量組與模型組相比，p＜0.01，差異非常顯著;替米沙坦組、中藥中劑量組與模型組相比，α-SMA的表達明顯下降，p＜0.05，有顯著差異;中藥低劑量組與模型組相比，p＞0.05，差異無統(tǒng)計學意義。中藥高劑量組與中藥低劑量組相比，p＜0.05，有顯著差異。
　　結(jié)論:加味黃芪赤風湯可以調(diào)節(jié)LPS誘導的ECM降解失調(diào)，上調(diào)MMP-9/TIMP-1、MMP-2/TIMP-2比值，抑制ECM中ColⅣ的過度產(chǎn)生，促進ECM的降