加味黃芪赤風(fēng)湯對(duì)炎癥增生中的小鼠系膜細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、背景:腎小球系膜細(xì)胞異常增殖是多種腎小球疾病如IgA腎病、膜增殖性腎炎、狼瘡性腎炎、局灶節(jié)段性腎小球硬化、糖尿病腎小球硬化的主要病理改變。腎小球系膜細(xì)胞異常增殖可引起細(xì)胞外基質(zhì)的過(guò)量生成和聚集，進(jìn)展過(guò)程中系膜細(xì)胞不僅是受害者，而且通過(guò)分泌炎癥因子和細(xì)胞外基質(zhì)主動(dòng)參與腎小球炎癥的發(fā)展。并最終導(dǎo)致腎小球硬化、腎臟纖維化及終末期腎功能衰竭。因此設(shè)法控制系膜細(xì)胞增殖對(duì)爭(zhēng)取逆轉(zhuǎn)腎小球損傷、防止腎臟疾病向慢性化演變具有重要意義。細(xì)胞凋亡在腎小球增殖

2、性病變的形成和消散過(guò)程中起著非常重要的作用。近年來(lái)研究顯示，在某些自限性增殖性腎小球疾病中，增殖的腎小球系膜細(xì)胞可以通過(guò)細(xì)胞凋亡機(jī)制而自行緩解，使腎小球結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常。加味黃芪赤風(fēng)湯是張昱主任醫(yī)師治療慢性腎炎的常用方劑，前期研究顯示，加味黃芪赤風(fēng)湯藥物血清可以抑制LPS誘導(dǎo)的小鼠系膜細(xì)胞的增殖，減少系膜細(xì)胞基質(zhì)中Col-Ⅳ、FN和LN的表達(dá)。但對(duì)系膜細(xì)胞是否有促進(jìn)凋亡的作用，還未進(jìn)行相關(guān)研究。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究加味黃芪赤風(fēng)湯對(duì)炎癥增生中的小鼠

3、系膜細(xì)胞凋亡的影響，為其臨床運(yùn)用提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。
　　目的:探討加味黃芪赤風(fēng)湯(Modified Hangqichifeng Decoction，MHD)對(duì)炎癥增生中的小鼠系膜細(xì)胞(MMCs)凋亡的影響。
　　方法:加味黃芪赤風(fēng)湯及替米沙坦大鼠灌胃后，制備含藥血清，用含10％含藥血清的DMEM培養(yǎng)液體外作用于MMCs，LPS作為炎癥增生刺激因子，將細(xì)胞分為對(duì)照組、LPS組、替米沙坦組、加味黃芪赤風(fēng)湯高、中、低劑量組。采用

4、1.透射電鏡觀察MMCs超微結(jié)構(gòu)變化。2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡率(AnnexinⅤ-FITC/PI染色法)。3.Western Blot法檢測(cè)MMCs中Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:①電鏡觀察下，對(duì)照組、LPS組細(xì)胞胞體正常，細(xì)胞器較多，細(xì)胞呈圓形或橢圓形，核仁清晰，核膜邊緣光滑、完整。找不到凋亡小體、染色體邊集等凋亡結(jié)構(gòu)。替米沙坦組細(xì)胞皺縮，呈圓形，細(xì)胞包膜見(jiàn)多量突起，包漿內(nèi)細(xì)胞器略減少，擁擠。核仁

5、清晰可見(jiàn)，核膜厚、染色質(zhì)邊集。加味黃芪赤風(fēng)湯藥物血清各劑量組核仁消失，核膜厚，染色質(zhì)固縮，邊集明顯。②中藥各組凋亡率較LPS組相比，均顯著性增高(p＜0.01);替米沙坦組較LPS組相比，凋亡增加且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);而中藥各組之間兩兩比較，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，且有一定的量效關(guān)系;替米沙坦組與中藥低劑量組相比，無(wú)明顯差異(p＞0.05)，但與中藥中劑量和高劑量組相比，差異明顯（分別為p＜0.05、p＜0.01

6、）③空白對(duì)照組、脂多糖組與替米沙坦組之間Bcl-2、Bax蛋白的相對(duì)表達(dá)量之間無(wú)明顯差異(p＞0.05)，而中藥各組和LPS刺激組和替米沙坦組相比，Bcl-2蛋白的表達(dá)顯著減少(p＜0.01)，Bax蛋白的表達(dá)顯著增多(p＜0.01);加味黃芪赤風(fēng)湯各劑量組內(nèi)，Bcl-2蛋白的表達(dá)隨著中藥劑量的增高而遞減，且中藥高劑量組與中劑量組、中藥低劑量組相比，Bcl-2蛋白的表達(dá)顯著減少(p＜0.01)。④替米沙坦組、中藥各劑量組與空白對(duì)照組、脂

7、多糖組之間Caspase-3蛋白的相對(duì)表達(dá)量有顯著差異(p＜0.01);中藥各組與替米沙坦組相比，MMCs中Caspase-3蛋白水平有顯著升高(p＜0.01);中藥各劑量組之間，隨著劑量的升高，各組之間MMCs中Caspase-3蛋白的表達(dá)依次升高，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（中藥高劑量組和低劑量、中劑量相比，p＜0.01;中藥中劑量和低劑量相比，p＜0.05）;⑤與對(duì)照組和LPS組相比，替米沙坦組Bcl-2/Bax無(wú)明顯改變(p＞0.05);中

8、藥各劑量組和對(duì)照組、LPS組相比，Bcl-2/Bax有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（中藥低劑量組與對(duì)照組或LPS組相比，p＜0.05;中藥中劑量組、中藥高劑量組與對(duì)照組或LPS組相比，p＜0.01）;中藥各組與替米沙坦組相比，Bcl-2/Bax比值明顯減少（中藥低劑量組Bcl-2/Bax比值與替米沙坦組相比，p＜0.05;中藥中劑量、中藥高劑量組Bcl-2/Bax比值與替米沙坦組相比，p＜0.01）。中藥各劑量組之間兩兩比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，