大蒜素對(duì)肝纖維化大鼠細(xì)胞外基質(zhì)及相關(guān)炎癥因子的影響研究及機(jī)理探討.pdf

1、目的：
　　初步評(píng)價(jià)大蒜素對(duì)豬血清誘導(dǎo)的大鼠免疫性肝纖維化的防治效果，為大蒜素治療肝纖維化提供藥理學(xué)依據(jù)，具體內(nèi)容如下：1.大蒜素對(duì)豬血清誘導(dǎo)的大鼠免疫性肝纖維化的預(yù)防作用；2.大蒜素對(duì)豬血清誘導(dǎo)的大鼠免疫性肝纖維化的治療作用；3.大蒜素對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)主要成分的影響；4.大蒜素對(duì)炎癥細(xì)胞因子及肝臟免疫功能的調(diào)節(jié)作用。
　　方法：
　　采用豬血清腹腔注射法建立大鼠肝纖維化模型，實(shí)驗(yàn)時(shí)間共12周。將50只SD大鼠隨機(jī)分為5組

2、：正常對(duì)照組、模型組、小劑量預(yù)防組、中劑量預(yù)防組、中劑量治療組。除正常對(duì)照組，余組采用豬血清腹腔注射法建立肝纖維化模型，5ml/只，每周2次，共12周。小、中劑量預(yù)防組于實(shí)驗(yàn)開始，分別予以大蒜素11、22 mg/(kg·d)灌胃，共12周。中劑量治療組于實(shí)驗(yàn)第9周起予以大蒜素22 mg/(kg·d)灌胃，共4周。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)束，將大鼠麻醉后心臟采血制備血清，留取肝臟組織樣本。檢測(cè)以下內(nèi)容：（1）采用HE染色及天狼星紅染色進(jìn)行肝臟病

3、理組織學(xué)觀察；（2）肝功能：采用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)大鼠血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、總膽紅素（TB）、間接膽紅素（IB）、直接膽紅素（DB）；（3）血清中細(xì)胞外基質(zhì)主要成分：采用ELISA法檢測(cè)血清中Ⅰ型膠原（CⅠ）、Ⅲ型前膠原氨基端肽（PⅢP）、Ⅳ型膠原（CⅣ）；（4）肝組織中細(xì)胞外基質(zhì)主要成分的表達(dá)：采用免疫蛋白印記法（Western blot）法檢測(cè)肝組織中Ⅰ型膠

4、原蛋白、Ⅳ型膠原蛋白的表達(dá)水平；（5）a-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）：采用ELISA法檢測(cè)血清中α-SMA；（6）炎癥因子：采用ELISA法檢測(cè)血清中生長(zhǎng)轉(zhuǎn)化因子-β1（TGF-β1）、白介素-10（IL-10）、干擾素-γ（IFN-γ）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）；
　　結(jié)果：
　?。?）肝臟病理組織學(xué)觀察：肝臟病理組織學(xué)檢查結(jié)果顯示大蒜素預(yù)防及治療組肝細(xì)胞變性和纖維化程度明顯減輕，肝組織結(jié)構(gòu)比較完好。與模型組比較，

5、大蒜素小劑量預(yù)防組、大蒜素中劑量預(yù)防組、大蒜素中劑量治療組纖維增生程度較輕。
　　（2）肝功能水平變化：各組大鼠血清ALT、AST、TP、ALB、TB、DB、IB水平均位于正常范圍，各組大鼠肝功能指標(biāo)比較后未見明顯差異，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　?。?）血清中細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分變化：與模型組比較，小劑量預(yù)防組、中劑量預(yù)防組、中劑量治療組CⅠ、PⅢNP水平顯著下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。與模型組比較

6、，中劑量預(yù)防組、中劑量治療組C IV水平顯著下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　?。?）肝組織中細(xì)胞外基質(zhì)主要成分的變化：與模型組比較，小劑量預(yù)防組、中劑量預(yù)防組、中劑量治療組CⅠ蛋白、C IV蛋白表達(dá)水平顯著下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　?。?）α-SMA水平變化：與模型組比較，中劑量預(yù)防組、中劑量治療組α-SMA水平顯著下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　（6）血清中炎癥因子水

7、平變化：與模型組比較，小劑量預(yù)防組、中劑量預(yù)防組IL-6、TNF-α水平明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與模型組比較，小劑量預(yù)防組、中劑量預(yù)防組、中劑量治療組TGF-β1水平較明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與模型組比較，小劑量預(yù)防組、中劑量預(yù)防組、中劑量治療組IFN-γ明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與模型組比較，小劑量預(yù)防組、中劑量預(yù)防組、中劑量治療組IL-10水平無(wú)明顯改善，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意