中緬邊境間日瘧原蟲青蒿琥酯敏感性研究.pdf

1、目的：調(diào)查中緬邊境間日瘧原蟲青蒿琥酯敏感性及敏感性程度與其可能相關(guān)分子標志物Pvcrt-o、Pvmdr1基因多態(tài)性的關(guān)系。
　　方法：(1)采集瘧疾患者血樣，將經(jīng)過鏡檢和PCR鑒定確認為間日瘧病人血樣進行短期體外培養(yǎng)后，用微量法檢測間日瘧原蟲對青蒿琥酯的藥物敏感性，并計算各間日瘧原蟲樣本的青蒿琥酯IC50值。（2）采用PCR擴增間日瘧原蟲轉(zhuǎn)運蛋白（Pvcrt-o）基因片段、產(chǎn)物測序，與野生型Pvcrt-o基因（AF314649）進

2、行比對，分析其多態(tài)性。（3）比較Pvcrt-o、Pvmdr1各突變型樣本青蒿琥酯IC50值與野生型樣本青蒿琥酯IC50值的差異。
　　結(jié)果：(1)37例中緬邊境間日瘧原蟲青蒿琥酯IC50值分布于0.1196-11.0300 nM區(qū)間，其95％置信區(qū)間（95%CI of geo. Mean，95%CI）為2.172-4.271 nM，IC50的幾何均數(shù)（Geometric mean）為3.045 nM，中位數(shù)（Median）為3.4

3、68 nM，高于文獻報道的印度尼西亞、韓國、中國中部間日瘧原蟲青蒿琥酯IC50值。(2)上述37例間日瘧原蟲青蒿琥酯敏感性檢測樣本Pvcrt-o基因PCR擴增并測序成功后，經(jīng)與野生型Pvcrt-o基因（AF314649）比對分析，發(fā)現(xiàn)5例攜帶R317W突變，突變率為14%；3例攜帶E299K突變，突變率為5.4%；1例攜帶G298E突變，突變率為2.7%；1例攜帶S279C突變，突變率為2.7%。(3) Pvcrt-o基因W317突變型

4、間日瘧原蟲樣本青蒿琥酯IC50值與R317野生型間日瘧原蟲樣本的青蒿琥酯IC50值之間無顯著差異（P>0.05）。K299突變型間日瘧原蟲樣本的青蒿琥酯IC50值與E299野生型樣本的青蒿琥酯IC50值之間亦未見顯著差異（P>0.05）。（4）根據(jù)本課題組前期對這些進行青蒿琥酯敏感性測定間日瘧原蟲樣本Pvmdr1基因測序結(jié)果，在成功進行Pvmdr1基因測序的22例樣本中， F976突變型樣本的青蒿琥酯IC50值與Y976野生型樣本的IC

5、50值之間無顯著差異（P>0.05），L1076突變型樣本的青蒿琥酯IC50值與F1076野生型樣本的青蒿琥酯IC50值之間無顯著差異（P>0.05），F(xiàn)976、L1076雙突變型樣本的青蒿琥酯IC50值與野生型樣本的青蒿琥酯IC50值亦無顯著性差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：(1)中緬邊境地區(qū)的間日瘧原蟲對青蒿琥酯存在敏感性下降的跡象。(2)發(fā)現(xiàn)中緬邊境地區(qū)間日瘧原蟲Pvcrt-o基因存在R317W、E299K、G298E和S