自噬在人肝癌細胞株HepG2-ADM對ADM耐藥中的作用研究.pdf

1、目的:通過應用自噬抑制劑氯喹抑制自噬等方式，觀察人肝癌細胞株HepG2/ADM對阿霉素（ADM）耐藥性的變化，探討自噬在人肝癌細胞株HepG2/ADM對ADM耐藥中的作用，進而了解自噬在肝細胞癌耐藥中的作用。
　　方法:體外培養(yǎng)人肝癌HepG2細胞株及其耐藥株人肝癌HepG2/ADM細胞株;CCK-8比色法檢測HepG2/ADM細胞株對ADM的耐藥性;MDC法觀察不同濃度ADM作用于HepG2/ADM細胞株后胞漿內(nèi)自噬小泡的分布情

2、況，WB法檢測不同濃度ADM作用于HepG2/ADM細胞株后LC3、P62的蛋白表達情況;CCK-8比色法檢測自噬抑制劑氯喹二磷酸鹽(CQ)對人肝癌耐藥細胞株HepG2/ADM的抑制作用;MDC法觀察ADM組、CQ組、CQ+ADM組作用于HepG2/ADM細胞株后胞漿內(nèi)自噬小泡的分布情況，Western Blot法檢測ADM組、CQ組、CQ+ADM組作用于HepG2/ADM細胞株后LC3、P62的蛋白表達情況;CCK-8法檢測抑制自噬前

3、后耐藥細胞株HepG2/ADM對ADM藥敏性的變化，觀察耐藥的逆轉效果;
　　結果:
　　1.ADM對HepG2的IC50為0.77±0.11mg/L，對HepG2/ADM細胞的IC50為5.01±1.43mg/L，HepG2/ADM對ADM的耐藥指數(shù)為6.51。
　　2.MDC法觀察到ADM作用于HepG2/ADM細胞株后胞漿出現(xiàn)自噬泡的堆積，LC3-Ⅱ表達比率隨ADM濃度升高而升高，P62表達比率隨ADM濃度升高而

4、降低。
　　3.選擇可有效抑制自噬流，濃度為10-50umol/ml的CQ溶液作用于HepG2/ADM細胞株，它的生長抑制率全部小于10％，沒有明顯毒性作用。
　　4.MDC法觀察到ADM組、CQ組、ADM+CQ組細胞胞漿內(nèi)均出現(xiàn)自噬泡的堆積，以ADM+CQ組最為明顯，陰性對照組未見明顯自噬泡堆積現(xiàn)象。Western Blot法可檢測到:相較于陰性對照組，ADM組LC3-Ⅱ表達比率升高，P62表達降低，CQ組LC3-Ⅱ表達比

5、率升高，P62表達無明顯變化，CQ+ADM組LC3-Ⅱ表達比率明顯升高，P62表達較CQ單獨作用者稍低，較ADM單獨作用組稍高。
　　5.用CQ抑制自噬后，ADM對HepG2/ADM細胞株的IC50由ADM單獨作用的5.01±1.43mg/L降至2.83±0.14mg/L，逆轉倍數(shù)為1.77倍。
　　結論:
　　1.ADM作用于HepG2/ADM時，誘發(fā)了人肝癌耐藥細胞株HepG2/ADM的自噬。自噬水平隨ADM濃度的