分泌期uNK細(xì)胞及其相關(guān)因子高表達(dá)與胚胎反復(fù)種植失敗的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景
　　反復(fù)種植失?。╮epeated implant failure，RIF）的具體分子機(jī)制尚不十分明確，目前已知2/3的RIF是由子宮內(nèi)膜容受性失調(diào)引起的，究其原因可能與免疫相關(guān)，已有的免疫學(xué)研究表明，妊娠是一種同種異體排斥現(xiàn)象，正常妊娠的胚胎，為半同體組織抗原不被母體排斥影響而生存，蛻膜組織與正常免疫微環(huán)境有一定關(guān)聯(lián)。
　　子宮自然殺傷細(xì)胞（uterine natural killer cell，uNK）是子宮內(nèi)

2、膜特有的自然殺傷（NK）細(xì)胞，表面特異性標(biāo)記是CD56，絕大部分uNK細(xì)胞表型為CD（56bright） CD16（-），細(xì)胞毒性低，分泌免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子、血管生長因子等，在著床和蛻膜免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮積極功能作用。反復(fù)種植失敗患者分泌期CD56+細(xì)胞比率高于正常婦女，提示uNK細(xì)胞可能在反復(fù)種植失敗中對子宮內(nèi)膜容受性的調(diào)節(jié)起到一定作用。白細(xì)胞介素-15（interleukelin-15，IL-15）是屬于Th1相關(guān)性細(xì)胞因子，有研究顯示它

3、能促進(jìn)NK細(xì)胞的分化和功能作用，正常婦女子宮內(nèi)膜分泌期 IL-15 mRNA表達(dá)上調(diào)，在分泌晚期升高為胚胎著床做好準(zhǔn)備。IL-15是否在反復(fù)種植失敗的患者分泌期內(nèi)膜的表達(dá)增加，需要作進(jìn)一步研究。有研究提示當(dāng)腫瘤壞死因子-α（tumour necrosis factor-α,TNF-α）表達(dá)過高時(shí)，打破了種植窗Th1/Th2因子的平衡，抑制子宮內(nèi)膜蛻膜化進(jìn)程，促使上皮細(xì)胞凋亡，增加Th1型細(xì)胞因子的免疫殺傷反應(yīng)，阻斷滋養(yǎng)細(xì)胞的侵入，產(chǎn)生前

4、列腺素和活化金屬蛋白酶（MMPs）如MMP-2和MMP-9,降解絨毛的細(xì)胞外基質(zhì),引發(fā)早期妊娠失敗。因此,uNK細(xì)胞與胚胎種植、胎兒生長發(fā)育和早期胎盤密切相關(guān),這種關(guān)系一旦失去平衡，就會引起反復(fù)種植失敗或早期自然流產(chǎn)。
　　在各種打破免疫因素平衡的改變可能導(dǎo)致胚胎著床失敗，因此本研究檢測RIF子宮內(nèi)膜 CD56、IL-15、TNF-α的表達(dá)改變，探索其與RIF發(fā)生的相關(guān)性。
　　目的
　　1.分別檢測RIF與正常分泌期

5、子宮內(nèi)膜CD56、IL-15、TNF-α的表達(dá)情況。
　　2．探索CD56、IL-15、TNF-α在RIF患者子宮內(nèi)膜分泌期是否表達(dá)相關(guān)，為RIF患者的臨床治療提供理論依據(jù)。
　　材料與方法
　　本研究課題經(jīng)過鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院的倫理委員會批準(zhǔn)，研究中所有入組研究對象均已告知實(shí)驗(yàn)內(nèi)容并已簽署知情同意書。選擇2016年9月至2017年3月于本院生殖中心行IVF-ET/ICSI-ET/Thaw-ET助孕的患者中有助孕妊娠

6、史擬再次助孕者為對照組，以至少移植4個優(yōu)質(zhì)胚胎或至少移植三個新鮮周期或冷凍周期后仍未能實(shí)現(xiàn)臨床妊娠的患者為實(shí)驗(yàn)組。本實(shí)驗(yàn)分為兩個部分，第一部分實(shí)驗(yàn)包括10例對照組和12例實(shí)驗(yàn)組，用qRT-PCR法檢測子宮內(nèi)膜CD56、IL-15、TNF-α的定量表達(dá)；第二部分實(shí)驗(yàn)包括10例對照組和12例實(shí)驗(yàn)組，用免疫組化法檢測子宮內(nèi)膜CD56、IL-15、TNF-α的定位表達(dá)。
　　結(jié)果
　　1. qRT-PCR法檢測結(jié)果顯示，CD56、I

7、L-15、TNF-α在分泌期正常子宮內(nèi)膜與反復(fù)種植失敗患者內(nèi)膜均有表達(dá)，但在RIF組表達(dá)均顯著高于對照組，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（CD56：4.533±2.616vs.1.302±1.163，P=0.002；IL-15：4.064±2.247vs.1.614±1.713，P=0.01； TNF-α：6.313±1.912vs.1.479±0.986， P=0.000）。
　　2.免疫組化結(jié)果顯示，CD56、IL-15、TNF-α在分

8、泌期正常子宮內(nèi)膜與反復(fù)種植失敗患者子宮內(nèi)膜腺上皮與基質(zhì)細(xì)胞中均有表達(dá)，RIF組的平均光密度值顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3. CD56的表達(dá)升高對RIF的診斷效能高，且與IL-15和TNF-α的表達(dá)均呈正相關(guān)(P<0.05)。
　　結(jié)論
　　1. CD56、IL-15、TNF-α在反復(fù)種植失敗分泌期子宮內(nèi)膜比正常內(nèi)膜表達(dá)均升高。
　　2. CD56的表達(dá)升高對RIF有診斷價(jià)值，且與IL