雞胚不同組織細(xì)胞的體外培養(yǎng)及永生化.pdf

1、雞胚永生化細(xì)胞系可用于病理學(xué)診斷、疫苗生產(chǎn)及其效力與安全性檢測(cè)。鑒于目前國內(nèi)還沒有該細(xì)胞系的建立,本研究通過體外培養(yǎng)雞胚不同的組織細(xì)胞,對(duì)其基本生物特性進(jìn)行了測(cè)定,并采用物理、化學(xué)及細(xì)胞融合等方法,體外誘導(dǎo)雞胚各組織細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化,建立雞胚永生化細(xì)胞系。
　　 研究中取雞胚軀體來源細(xì)胞(Body Tissue Cells,BTC)、心臟來源細(xì)胞(Heart Tissue Cells,HTC),肺來源細(xì)胞(Lung Tissue C

2、ells,LTC)進(jìn)行體外培養(yǎng)及細(xì)胞凍存。對(duì)上述細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)、生長曲線、分裂指數(shù)、染色體核型等指標(biāo)進(jìn)行了綜合分析。
　　 采用刮除法和相差消化法,從上述三種組織細(xì)胞中分離純化了以上相應(yīng)組織細(xì)胞。純化的細(xì)胞大小相近,形態(tài)相似,生長特性一致。用DAPi染色對(duì)分離純化得到的細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步的形態(tài)鑒定及支原體污染檢測(cè)。用抗波形蛋白單克隆抗體、抗結(jié)蛋白單克隆抗體、抗角蛋白-19單克隆抗體對(duì)BTC、HTC、LTC細(xì)胞分別做了免疫組化鑒定,

3、檢測(cè)得出BTC為成纖維細(xì)胞、HTC為成肌細(xì)胞、LTC為上皮類細(xì)胞。
　　 用MNNG、疊氮鈉及紫外線誘導(dǎo)雞胚不同組織的三、四代細(xì)胞,計(jì)算半致死劑量。篩選誘導(dǎo)后的細(xì)胞,并長期傳代培養(yǎng)和凍存,其中有兩株細(xì)胞(BTC、HTC)分別傳代到第36代和29代。
　　 探索不同分子量、不同濃度的PEG作融合劑對(duì)誘導(dǎo)癌細(xì)胞與雞胚體細(xì)胞融合的最適條件,在HAT選擇培養(yǎng)基下篩選融合細(xì)胞,得到雜交瘤細(xì)胞。對(duì)其進(jìn)行克隆和傳代培養(yǎng)后,雜交細(xì)胞生長