雞胚腸組織細胞培養(yǎng)及益生菌抗NDV作用研究.pdf

1、已有的研究證實益生菌具有抑制輪狀病毒和HIV所致腹瀉的作用，但益生菌的抗病毒作用尚缺乏系統(tǒng)研究。因此，本實驗采用MTT和NDV-HA方法，分別在體外、雞胚成纖維細胞（CEF）和雞胚腸組織細胞上初步評價了益生菌對NDV血凝價和抑制率的影響，從而探討益生菌的抗病毒作用并分析其可能的機制。
　　 實驗中首先利用革蘭氏染色方法檢測了益生菌對CEF和雞胚腸組織細胞的黏附能力，結(jié)果確定益生菌對CEF具有一定的黏附能力，但明顯低于對雞胚腸組織

2、細胞黏附能力：利用MTT法測定益生菌處理后的細胞活性，經(jīng)統(tǒng)計分析得出益生菌對細胞的最大無毒濃度為干酪乳桿菌1011cfu/ml，嗜酸乳桿菌1012cfu/ml，益生菌培養(yǎng)上清1:2的稀釋液，益生菌滅活菌體和破碎菌體成分在實驗濃度均未顯現(xiàn)細胞毒害現(xiàn)象；利用藥敏試驗篩選出對干酪乳桿菌和嗜酸乳桿菌均高度敏感的抗生素一慶大霉素。然后，根據(jù)上述實驗結(jié)果進行了細胞上的益生菌抗病毒研究。
　　 實驗分組如下：第1組：益生菌與上述2種細胞預先分

3、別孵育后再攻毒；第2組：2種細胞感染病毒后再接入益生菌；第3組：益生菌與病毒同時接入細胞；第4組：益生菌對照；第5組：病毒對照；第6組：正常細胞對照。
　　 結(jié)果顯示：在體外益生菌對NDV血凝價影響的實驗中，所選擇的5種益生菌及其培養(yǎng)上清都極顯著地降低了NDV的血凝價，但各菌種之間存在程度不同的差異；而實驗中選擇的2種致病菌及其培養(yǎng)上清對NDV的血凝價均沒有影響，這一結(jié)果說明益生菌可能具有直接破壞病毒的作用，并且具有菌種特異性。

4、以MTT法測定益生菌和NDV處理后的細胞活性，通過公式計算病毒抑制率，結(jié)果顯示，無論是在CEF上，還是在雞胚腸組織細胞上，益生菌都可以顯著的提高對NDV的抑制率，并且益生菌的這種作用具有量效關系和時效關系。益生菌-細胞-NDV相互作用后的細胞培養(yǎng)上清中NDV血凝價的變化結(jié)果顯示，益生菌及其培養(yǎng)上清與NDV同時接入細胞可以極顯著的降低NDV的血凝價，推測其可能具有直接的殺滅病毒作用。在實驗中，我們分別研究了益生菌活菌、培養(yǎng)上清、滅活菌體和

5、破碎菌體成分的抗病毒作用，結(jié)果表明，益生菌的各種形式均具有一定的抗病毒作用，但在效果上存在一定的差異，原因可能是其抗病毒作用的機制不同。益生菌與細胞作用后再感染病毒，對NDV抑制率升高的結(jié)果反映出了益生菌對NDV吸附細胞的阻斷作用；從益生菌與病毒同時接入細胞后降低病毒對細胞侵害的現(xiàn)象，可以看出益生菌可能對病毒結(jié)構具有直接破壞作用；細胞感染病毒后再接入益生菌對NDV抑制率極低的現(xiàn)象說明，病毒感染后益生菌再很難發(fā)揮作用。
　　 綜上