細(xì)胞培養(yǎng)發(fā)展歷史

1、1856年，實現(xiàn)紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)紫杉醇的突破。1885年，Roux溫生理鹽水培育雞胚組織；1887年，培養(yǎng)皿（英文：Petridish）由在德國生物學(xué)家羅伯特科赫手下工作的細(xì)菌學(xué)家朱利斯理查德佩特里（JuliusRidPetri，1852－1921）于1887年設(shè)計，故也稱為“佩特里皿”。是一種用于細(xì)胞培養(yǎng)的實驗室器皿，由一個平面圓盤狀的底和一個蓋組成，一般用玻璃或塑料制成。1902年，植物細(xì)胞培養(yǎng)是在植物組織培養(yǎng)技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的

2、。1902年Haberlt確定了植物的單個細(xì)胞內(nèi)存在其生命體的全部能力(全能性)，使成為植物組織培養(yǎng)的開端。其后，為了實現(xiàn)分裂組織的無限生長，對外植體的選擇及培養(yǎng)基等方面進行了探索。1906年，Beebe和Ewing用蓋片懸滴培養(yǎng)法，以動物血清做培養(yǎng)基，培養(yǎng)狗淋巴細(xì)胞存活了72小時?，F(xiàn)代細(xì)胞培養(yǎng)是從Harrison(1907)和Carrel(1912)兩人開始的。Harrison參考前人經(jīng)驗，創(chuàng)建了蓋片覆蓋凹窩玻璃懸滴培養(yǎng)法。1907年

3、，哈里森(Harrison)在無菌條件下用淋巴液作培養(yǎng)基，培養(yǎng)蛙胚神經(jīng)組織存活數(shù)周，并觀察到神經(jīng)細(xì)胞突起的生長過程，由此創(chuàng)建了蓋片覆蓋凹窩玻璃懸滴培養(yǎng)法，奠定了動物組織體外培養(yǎng)的基礎(chǔ)。19101912年，Carrel采用無菌操作、更新培養(yǎng)基、傳代，完善了懸滴培養(yǎng)法；1912年，Haberlt的學(xué)生Kotte和美國的Robins在根尖培養(yǎng)中獲得了組織培養(yǎng)的成功。Kotte采用了無機鹽、葡萄糖、蛋白胨、天冬酰胺，及添加各種氨基酸的培養(yǎng)基。1

4、915年，昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)的鼻祖是德國人fhardBendict（1878—1958），發(fā)表了有關(guān)昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)的第一篇文章。1923年，Carral設(shè)計創(chuàng)立了卡氏瓶培養(yǎng)法，用此法可根據(jù)需要隨時更換培養(yǎng)液，既有利于組織不斷生長，又可以運用不同種類的營養(yǎng)液培養(yǎng)不同的細(xì)胞，極大地推動了當(dāng)時組織培養(yǎng)研究。在培養(yǎng)基方面，Earle在1948年設(shè)計了含有碳酸氫鈉等鹽類的Earle氏鹽溶液，Hank’s在1949年設(shè)計了Hank’s氏鹽溶液。Earle、

5、Dulbecco等于1943年創(chuàng)建單層細(xì)胞培養(yǎng)法，首建長期傳代的L細(xì)胞系；1948年Sanfd創(chuàng)建單細(xì)胞分離培養(yǎng)法，獲L細(xì)胞純系。1948年，體外細(xì)胞毒性試驗細(xì)胞毒性實驗它是利用體外細(xì)胞培養(yǎng)的方法，測定細(xì)胞溶解，抵制細(xì)胞生長的毒性作用來評價生物材料的潛在細(xì)胞毒性。1948年，RosenBluth等首次報道利用鼠成纖維細(xì)胞培養(yǎng)來篩選聚合物，開始了細(xì)胞毒性試驗評價生物材料的生物相容性的研究與應(yīng)用工作。1959年，美國M.Klein等用牛腎細(xì)

6、胞培養(yǎng)物最先分離到腺病毒(命名為“10”系腺病毒)，其抗原結(jié)構(gòu)類似于人腺病毒。1960年1960年，人的外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)方法是1960年由Mohead提出來的。正常情況下，人外周血小淋巴細(xì)胞都處在G1期（或G0期），但在體外給予一定的條件，進行培養(yǎng)，經(jīng)72h就可獲得大量的有絲分裂細(xì)胞。這種取材簡易、用血量少的培養(yǎng)方法已被廣泛采用。1961年，Hayflick首建人二倍體細(xì)胞系25種，開辟了應(yīng)用新方向。1962年，由Murashige和

7、Skoog為煙草細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計的MS培養(yǎng)基，其特點是無機鹽和離子濃度較高，是較穩(wěn)定的離子平衡溶液，它的硝酸鹽含量高，其養(yǎng)分的數(shù)量和比例合適，能滿足植物細(xì)胞的營養(yǎng)和生理需要，因而適用范圍比較廣，多數(shù)植物組織培養(yǎng)快速繁殖用。1963年，進行了單細(xì)胞克隆。原始的細(xì)胞株是成纖維細(xì)胞，貼壁依賴性。但后來經(jīng)無數(shù)次傳代后細(xì)胞可懸浮生長，它廣泛用于增殖各種病毒，生產(chǎn)獸用疫苗。1964年，我國就開始進行人參細(xì)胞培養(yǎng)。1965年，有學(xué)者在進行魚類細(xì)胞培養(yǎng)時，

8、首次發(fā)現(xiàn)魚類細(xì)胞能夠分泌類似哺乳類IFN的抗病毒活性物質(zhì)，之后陸續(xù)發(fā)現(xiàn)多種魚類機體和體外培養(yǎng)細(xì)胞均能誘生出IFN。1966年，Steele和Breg成功的進行了羊水細(xì)胞培養(yǎng)及胎兒核型分析之后，使羊膜腔穿刺術(shù)廣泛地應(yīng)用于胎兒染色體疾病及先天性代謝病的產(chǎn)前...Cdocentesis），隨后此方法開始廣泛應(yīng)用于胎兒疾病的產(chǎn)前診斷。1967年，Mancini和Yates在雞胚腦細(xì)胞培養(yǎng)中首次成功繁殖了AEV的VR株。隨后雞胚成纖維細(xì)胞、腎細(xì)胞

9、、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和雛雞胰細(xì)胞也被用于病毒適應(yīng)株和野毒株的培養(yǎng)，病毒滴度，特別是自然毒株，一般較低，且未見細(xì)胞病變。1967年，HyClone實驗室創(chuàng)建于1967年，從為美國大學(xué)基礎(chǔ)研究中的細(xì)胞培養(yǎng)開發(fā)高質(zhì)量的胎牛血清做起，HyClone最先使用科學(xué)的收集方法和生產(chǎn)工藝生產(chǎn)出了內(nèi)毒素和血紅蛋白含量極低的高品質(zhì)血清。第一個使用了高效過濾方法，大大的提高了FBS的質(zhì)量和促生長特性。1969年，煙草的單個單倍體孢子培養(yǎng)成了完整的單倍體植株。197

10、0年，Melchers在金魚草懸浮細(xì)胞培養(yǎng)中獲得了溫度突變體。1970年P(guān)SCarlson、H.Binding和YMHeimer等人分別分離出煙草營養(yǎng)缺陷型細(xì)胞、矮牽牛抗鏈霉素細(xì)胞系及煙草抗蘇氨酸細(xì)胞系。1971年，地鼠腎細(xì)胞疫苗（PHKCV）：原代地鼠腎細(xì)胞培養(yǎng)疫苗，加拿大、前蘇聯(lián)于1971年開始使用。1972年，中空纖維細(xì)胞培養(yǎng)是由RAKnazek于1972年模擬體內(nèi)微循環(huán)，設(shè)計了小型中空纖維細(xì)胞培養(yǎng)裝置，中空纖維是用聚砜或丙烯的聚