櫛孔扇貝(Chlamys farreri)心肌組織細(xì)胞培養(yǎng)的初步研究.pdf

1、海水貝類具較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，其養(yǎng)殖已成為我國海水養(yǎng)殖業(yè)的支柱產(chǎn)業(yè)。近年來，海水養(yǎng)殖貝類大規(guī)模死亡事件頻繁發(fā)生，急需建立穩(wěn)定的貝類細(xì)胞培養(yǎng)體系，從細(xì)胞和分子水平研究病原體及其致病機(jī)理，從而有效檢測(cè)、預(yù)防疾病的發(fā)生。細(xì)胞培養(yǎng)便于開展細(xì)胞工程育種技術(shù)，培育出抗逆能力強(qiáng)的新品種，也是解決病害防治的手段之一。貝類種質(zhì)資源豐富，其細(xì)胞系的建立將有助于遺傳資源的長期保存。此外，隨著環(huán)境污染的加劇，貝類作為敏感生物的指示作用也日益凸顯。本研究以我國北方沿

2、海重要水產(chǎn)養(yǎng)殖貝類櫛孔扇貝為研究對(duì)象，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的研究，旨在建立一套櫛孔扇貝組織細(xì)胞體外長期培養(yǎng)方法，為免疫學(xué)研究、病原體侵染機(jī)制研究、物種保護(hù)、遺傳育種、環(huán)境監(jiān)測(cè)等搭建平臺(tái)，并最終為櫛孔扇貝細(xì)胞系的建立構(gòu)建基礎(chǔ)。 櫛孔扇貝心肌組織原代培養(yǎng)單因子條件優(yōu)化結(jié)果顯示，基本培養(yǎng)基L-15能夠最大化促進(jìn)植塊細(xì)胞遷出及較長時(shí)間維持細(xì)胞體外存活，L-15+M199次之，M199效果較差；5％FBS能夠最大化促進(jìn)植塊細(xì)胞遷出及較長時(shí)間維持細(xì)

3、胞體外存活，10％FBS次之，15％及20％FBS效果較差。在基本培養(yǎng)基L-15、5-10％FBS培養(yǎng)條件下，細(xì)胞平均存活2周左右，部分細(xì)胞可維持50d。體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞具活躍的收縮現(xiàn)象，細(xì)胞單層處可形成肌管及肌絲結(jié)構(gòu)。超微結(jié)構(gòu)顯示培養(yǎng)10 d后的心肌細(xì)胞中肌原纖維局部存在，培養(yǎng)更長時(shí)間的心肌細(xì)胞中肌漿網(wǎng)膨大為若干空泡。隨著培養(yǎng)，細(xì)胞琥珀酸脫氫酶活性逐漸減弱，而堿性磷酸酶活性相對(duì)穩(wěn)定。 以L-15為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的F

4、BS、?；撬?、Ca2+，正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，5％FBS利于植塊細(xì)胞遷出，血清濃度越高，細(xì)胞遷出效果越差。5％FBS與各濃度?；撬峤M合可以顯著延長細(xì)胞存活時(shí)間1-2周；高濃度?；撬?50 mM)效果更加顯著，細(xì)胞存活較低濃度牛磺酸(5mM、20mM)組延長10-30 d左右，部分心肌細(xì)胞可以維持正常生長狀態(tài)達(dá)60 d以上。20％FBS與各濃度牛磺酸組合的實(shí)驗(yàn)組中，多數(shù)細(xì)胞存活2周左右，部分心肌細(xì)胞可存活1個(gè)月左右，且這些細(xì)胞多表現(xiàn)為體積增大